ICS 65.120 B 46 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T 17480—2008 代替GB/T17480—1998 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 Determination of aflatoxin B, in animal feeding stuffs- Enzyme-linked immunosorbent assay 2008-11-21发布 2009-02-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T17480—2008 前言 本标准代替GB/T17480—1998《饲料中黄曲霉毒素B的测定酶联免疫吸附法》。 本标准与GB/T17480—1998相比主要修改如下： 范围中增加“本标准检出限为0.1ug/kg"； 规范性引用文件中，用“GB/T20195动物饲料试样的制备”代替"GB/T8381一1987饲料中 黄曲霉毒素B的测定方法”； 试剂盒组成中，增加“注意：不同测试盒制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按 说明书要求规范操作”； 仪器、设备条款中，删除冰箱条款；增加电动振荡器、具塞磨三角瓶； 一 将“取样”条款改为“试样制备”，同时将“按GB/T8381一1987中5.1要求采集、处理样品，制 成分析用的试样”改为“按GB/T20195要求制备试样”； 限量测定条款中，将测定操作的分级条款合并为一个条款，并删除表格，均用文字叙述测定 过程； 定量测定条款中增加“结果保留2位有效数字”； 原“其他”条款删除，将“凡接触AFB的容器，需浸人1%次氯酸钠（NaCIOz）溶液，12h后清洗 备用。为分析人员安全，操作时要带上医用乳胶手套”改为“警告”条款； 增加了资料性附录A； 将样品溶液稀释表及稀释倍数与结果计算表作为资料性附录B。 本标准的附录A和附录B均为资料性附录。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：江苏省微生物研究所有限责任公司。 本标准主要起草人：李利东、宓晓黎、袁建兴、杜姝莲。 本标准于1998年首次发布，本次为第一次修订。 1 SAG GB/T17480—2008 饲料中黄曲霉毒素B，的测定 酶联免疫吸附法 SAG 1范围 本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B的酶联免疫吸附测定（ELISA)方法 本标准适用于各种饲料原料、配合饲料及浓缩饲料中黄曲霉毒素B的测定。 本标准检出限为0.1μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T20195动物饲料试样的制备（GB/T20195—2006,ISO6498：1998,IDT） 3原理 试样中黄曲霉毒素Bi、酶标黄曲霉毒素BI抗原与包被于微量反应板中的黄曲霉毒素B特异性抗 体进行免疫竞争性反应，加人酶底物后显色，试样中黄曲霉毒素B的含量与颜色成反比。用目测法或 仪器法通过与黄曲霉毒素B标准溶液比较判断或计算试样中黄曲霉毒素B的含量。 4试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸留水或去离子水或相当纯度的水 4.1黄曲霉毒素B酶联免疫测试盒中的试剂 注意：不同测试盒制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按说明书要求规范操作。 4.1.1包被抗黄曲霉毒素Bi抗体的聚苯乙烯微量反应板。 4.1.2样品稀释液：甲醇-蒸馏水（7十93）。 4.1.3黄曲霉毒素B标准溶液：1.00μg/L、50.00μg/L。 警告一一凡接触黄曲霉毒素B，的容器，需浸入1%次氯酸钠（NaCIO2）溶液，12h后清洗备用。为 分析人员安全，操作时要带上医用乳胶手套。 4.1.4酶标黄曲霉毒素B1抗原：黄曲霉毒素Bi-辣根过氧化物酶交联物。 4.1.50.01mol/LpH7.5磷酸盐缓冲液的配制：称取3.01g磷酸氢二钠（NazHPO.·12H,O）、 0.25g磷酸二氢钠（NaHzPO·2HzO)、8.76g氯化钠（NaCI)，加水溶解至1L。 4.1.6酶标黄曲霉毒素B抗原稀释液：称取0.1g牛血清白蛋白(BSA)溶于100mLpH7.5磷酸盐缓 冲液（4.1.5）。 4.1.70.1mol/LpH7.5磷酸盐缓冲液：称取30.1g磷酸氢二钠（NazHPO·12H,O）、2.5g磷酸二 氢钠（NaH,PO4·2H,O）、87.6g氯化钠（NaCI)，加水溶解至1L。 4.1.8洗涤母液：吸取0.5mL吐温-20于1000mL0.1mol/LpH7.5磷酸盐缓冲液（4.1.7） 4.1.9pH5.0乙酸钠-柠檬酸缓冲液：称取15.09g乙酸钠（CH.COONa·3HO)、1.56g柠檬酸 (CH.O·H,O).加水溶解至1L。 4.1.10底物溶液a：称取四甲基联苯胺（TMB）0.2g溶于1LpH5.0乙酸钠-柠檬酸缓冲液。 1