ICS 65.020.30 B 44 中华人民共和国国家标准 GB/T 14926.53—2001 实验动物 血凝试验 Laboratory animalHaemoglutination test (HA) 2001-08-29发布 2002-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T14926.53—2001 前 言 本标准修订了GB/T14926.24—1994《实验动物 小鼠肺炎病毒检测方法》中的血凝试验方法，将 其作为一个独立标准列出。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位：中国实验动物学会。 本标准主要起草人：贺争鸣。 中华人民共和国国家标准 实验动物 血凝试验 GB/T14926.53—2001 Laboratory animal-Haemoglutination test(HA) 1范围 本标准规定了血凝试验（HA）所用试剂、器材和操作步骤等。 本标准适用于实验动物病毒抗原的检测。 2原理 某些病毒在一定的条件下，能够选择性地凝集某些动物红细胞，产生可见的凝集反应。 3主要试剂与器材 3.1试剂 3.1.1血凝素 血凝素抗原除部分病毒（如痘类病毒）能与感染性颗粒分开外，大部分是与病毒的感染性颗粒相关 联，凡培养于鸡胚或组织培养中的病毒及其抗原物质，经离心除去沉淀，均可用作血凝试验的抗原（见表 1、表2)。 表1 血凝素制备方法 病毒 细胞 收毒(d) 病变(十) 抗原处理 滴度（HA) 备注 KRV RE 7~12 2~3 冻融2~3次，2000r/min 64~128 H-1 RE 7~12 2~3 离心10~20min，取上清 128 CPV FK81 3~5 3~4 离心10~20min，取上清 >640 ICHV MDCK 3~4 3~4 培养物冻融后离心，取上 >1 280 清，经60℃水浴作用10~ 20 min RV BHK21 4~5 2~3 冻融2~3次，2000r/min >320 基础液中含0.2%~0.4% 离心20min取上清 牛血清白蛋白 表2血凝素制备方法 动物 接种途 时间 病毒 抗原取材 抗原处理 滴度（HA) (日龄) 径剂量 (d) 小鼠 ic0.02 ml 脑 研磨成10%悬液，冻化2~3次 128~512 TMEV 5~7 (14~21) 1000r/min离心10min，上清对 倍加0.5%胰酶，4℃可短期保存 Sendai 尿囊0.2mL 鸡胚（9） 尿囊液 3 2000rpm离心10min，取上清液 640 兔 sc 2 mL 肝 RHDV 2~4 研磨成10%悬液3000r/min离 8 190 心10min取上清 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01实施 1