ICS 65.020.30 B 44 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T14926.19—2001 代替GB/T14926.19—1994 实验动物 汉坦病毒检测方法 Laboratory animalMethod for examination of Hantavirus (HV) 2002-05-01实施 2001-08-29发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T 14926. 192001 前言 本标准是对GB/T14926.19一1994《实验动物流行性出血热病毒检测方法》的修订。将“实验动 物 流行性山血热病毒检测方法"改称为“实验动物 汉坦病毒检测方法”。删除了GB/T14926.19 1991中“5检测方法和结果判定"的内容，增加了检测病毒抗体的酶联免疫吸附试验和免疫荧光试验， 木标准出中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起节单位：中国实验动物学会。 本标推主要起草人：贺争鸣。 本标准丁1994年1刀首次发布， I 中华人民共和国国家标准 实验动物 B/T 14926.19—2001 汉坦病毒检测方法 代 GI3/T 14926.19—1994 Laboratory animal Method for cxamination of Hantavirus (HV) 1范围 本标准规定了汉坦病毒(IIV)的检测方法、试剂等。 本标准适用于小鼠,大鼠HV 的检测。 2 引用标准 下列标准所包含的条文.通过在本标准巾引用而构成为本标准的条文。本标准出版时·所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T14926.50一2001、实验动物酶联免疫吸附试验 GB/T14926.522001实验动物免疫荧光试验 3原理 根据免疫学原理,采HV抗原检测小鼠、人鼠血清中HV抗体。 4主要试剂和器材 4.1试剂 4.1.1ELISA抗原 4. 1. 1.1 特异性抗原 在生物安企柜内,用Hantaan 型或 Scoul 型毒株感染的 E6 细胞,当特异性荧光达一十十时,即可收 获培养物，冻融三次或超声波处理斥低速离心去除细胞碎片，1清液再经超速离心浓缩后制成ELISA 抗原。 4. 1. 1. 2正常抗原 E6细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的「清液， 4.1.2抗原片 在生物安全柜内,用Hantaan 型或 Seoul 型毒株感染 F6 细胞,每 2～3 d 更换维持液.培养 7～ 10d,用1FA法测定细胞内特异性荧光。当荧光达十十十时,将细胞用胰酶分散，用PBS洗涤,涂片。室 温「燥的同时，在紫外线下20 cm处照射30 min冷内酮固定10 min，一20C保存。 4.1.3阳性血清 用β丙内脂灭活HV抗原·免疫清洁或 SPF小鼠或大鼠所获得的抗血清 4.1.4阴性血清 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01实施 1