ICS 65.020.30 B 44 中华人民共和国国家标准 GB/T 14926.55—2001 实验动物 免疫酶组织化学法 Laboratory animal—Immunohistochemistry(IH) 2001-08-29发布 2002-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T 14926.55—2001 前 言 本标准规定了免疫酶组织化学法所用试剂、器材和操作步骤等 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位：中国实验动物学会。 本标准主要起草人：贺争鸣。 中华人民共和国国家标准 实验动物 免疫酶组织化学法 GB/T14926.55—2001 LaboratoryanimalImmunohistochemistry(IH) 1范围 本标准规定了免疫组织化学法（IH）所用试剂、器材和操作步骤等。 本标准适用于实验动物病毒抗原的检测。 2原理 用已知的特异性抗体与标本中待测抗原反应，如待测抗原是特异性抗体的相应抗原则形成抗原抗 体复合物。此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜 色反应。在普通显微镜下，根据颜色的反应判定结果。 3主要试剂与器材 3.1试剂 3.1.1抗病毒单克隆抗体或抗血清 3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬、猴IgG抗体标记辣根过氧化物酶 3. 1.3 PBS(0.01 mol/L,pH7. 6) 氯化钠 8.5 g 磷酸二氢钠(NaH,PO4·2H,O) 0.20 g 磷酸二氢钠（NaH,PO4·12H,O) 3. 12 g 蒸馏水 加至1000mL 3.1.4底物溶液 3,3-二胺基联苯胺盐酸盐(DAB) 40 mg PBS 100 mL 丙酮 5 mL 3%过氧化氢 0. 1 mL 3.2器材 3.2.1石蜡切片机或冰冻切片机。 3.2.2载玻片及盖玻片。 3.2.3普通显微镜 4操作步骤 4.1冰冻切片风干后用丙酮固定10～15min，石蜡切片，常规脱蜡至PBS（切片应用白胶或铬矾明胶 做粘合剂，以防脱片）。 4.2去内源酶 用0.3%过氧化氢甲醇溶液或1%盐酸酒精37℃作用30min。 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01实施 1