ICS 67.040 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 22506—2008 粮油检验 酶改性磷脂中1-和 2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法 Inspection of grain and oils—Determination of 1- and 2- acyl lysophosphatidylcholine in enzymatically modified phospholipids- High performance liquid chromatography 2008-11-04发布 2009-01-20实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22506—2008 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家粮食局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：江南大学。 本标准主要起草人：王兴国、金青哲，单良、刘元法、宋志华、潘秋琴。 1 GB/T22506—2008 粮油检验酶改性磷脂中1-和 2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定酶改性磷脂中1-溶血磷脂酰胆碱（l-aclylysophosphatidyl- choline;1-LPC)和2-溶血磷脂酰胆碱（2-aclylysophosphatidylcholine;2-LPC)的原理、试剂、仪器设 备、样品准备、操作步骤、结果表示及精密度和准确度。 本标准适用以大豆磷脂、蛋黄磷脂、菜籽磷脂为原料制备的溶血磷脂酰胆碱的测定。 本标准的检出限为0.1ug。 2规范性引用文件 下列标准中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 3原理 采用示差折光检测器检测，外标法定量。 4试剂 以下所用的试剂，除特殊注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水 4.195%乙醇。 4.2草酸(H,C,04·2H,0)。 4.3草酸溶液（0.02moL/L）：准确称取1.261g草酸（4.2），加水溶解并稀释至500mL。 4.4磷脂标准品!：磷脂酰胆碱（PC),1-棕榈酰-溶血磷脂酰胆碱（1-LPC),2-棕榈酰-溶血磷脂酰胆碱 (2-LPC)。 5仪器设备 5.1高效液相色谱仪：配折光检测器。 5.2高速离心机：10000r/min。 5.3纤维膜：0.45um。 5.4超声波清洗仪：180W。 5.5天平：分度值0.0001g。 1）标准品可使用Sigma公司的产品。给出Sigma公司仅为方便用户使用本标准，并无其他商业行为，其他凡是能 够达到要求的标准品，均可以选择使用。 1 GB/T22506—2008 6样品准备 称取50mg~100mg酶改性磷脂样品（m），用95%乙醇溶解稀释至25mL，用高速离心机（5.2）离 心，取上清液用0.45um纤维膜（5.3）过滤，现配现用。 7操作步骤 7.1色谱条件 色谱柱：氨基柱，250mm×4.6mm，粒径5um，或分离效果相当的色谱柱 声波（5.4)脱气处理。 流速：1 mL/min。 柱温：25℃。 进样量：10μL。 7.2标准曲线 分别精确称取适量预先经五氧化二磷干燥两天的磷脂酰胆碱、1-溶血磷脂酰胆碱、2-溶血磷脂酰胆 碱标准品（4.4），用95%乙醇（4.1)溶解、稀释，配置一系列浓度的标准溶液，标准溶液中各磷脂组分的 浓度在0.05mmoL/L~2.0mmoL/L范围内，现配现用。 峰面积对进样量绘制标准曲线。 标准品的色谱图参见附录A。 注：配制好的标准溶液应在12h内完成测定。 7.3色谱测定 条件进行色谱分析，记录峰面积。样品液中待测组分浓度较高时应进行适当稀释，保证其响应值均在仪 器检测的线性范围内。根据保留时间定性，外标法定量，得到样品中1-溶血磷脂酰胆碱和2-溶血磷脂 酰胆碱的摩尔浓度（c）。 注：配制好的样品液应在12h内完成测定。 8结果表示 样品中1-或2-溶血磷脂酰胆碱的含量按式（1）计算： ..(1) m 式中： d 样品中1-或2-溶血磷脂酰胆碱的含量，以质量分数计，%； 由外标法测得的样品中1-和2-溶血磷脂酰胆碱的浓度，单位为毫摩尔每升（mmol/L）； Mw —1-或2-溶血磷脂酰胆碱摩尔质量的平均值，单位为克每摩尔（g/mol)； V 样品最终定容体积，单位为毫升（mL）； 样品质量，单位为毫克（mg）。 9 精密度和准确度 测定值的相对标准偏差小于5%。不同浓度水平条件下，方法的回收率为96.7%～103.5%。 2 GB/T22506—2008 附录A （资料性附录） 磷脂酰胆碱(PC)和溶血磷脂酰胆碱（LPC)标准品色谱图 0. 035 2-棕酰一济[血磷脂酰胍碱 0. 300 1-棕桐酰-溶,血磷胎酰阻碱 0. 025- 0. 020 0, 015- 0. 010 0. 005 0. 000 0. 005 5 10 15 20 时问 /min 图A.1 磷脂酰胆碱(PC)和溶血磷脂酰胆碱（LPC)标准品色谱图