ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28086—2011 长针线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 Detection and identification of Longidorus spp. as virus vectors 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T28086—2011 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检疫 局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局和珠海市质量计量监督检测所。 本标准主要起草人：陈其文、张卫东、廖力、蒋立琴、顾建锋、杜宇、徐淼锋、迟远丽、乐海洋、张慧娟、 彭仁， GB/T28086—2011 长针线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了长针线虫属传毒种类的检疫鉴定方法。 本标准适用于植物根系、土壤及栽培介质中长针线虫属传毒种类的检疫鉴定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T24830拟毛刺线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 SN/T1157进出境植物苗木检疫规程 SN/T 1158 进出境植物盆景检疫规程 3长针线虫属（传毒种类）基本信息 3 中文名：长针线虫属传毒种类。 学名：Longidorus spp.。 英文名：virusvectorsspecies of Needlenematodes。 剑线虫属传毒种类隶属于线虫门Nematoda（Rudolphi，1808)Lankester，1877、无侧尾腺纲Adeno- phoreaLinstow，1905矛线目DorylaimidaPearse，1942、长针线虫科Longidoridae（Thorne，1935）Fil ipjev1934，长针线虫属Longidorus(Micoletzky，1922)Filipjev，1934。 长针线虫属传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫，主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等 寄主植物材料的调运传播。 长针线虫属传毒种类的其他信息参见附录A。 4方法原理 将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株，经漏斗法或浅盘法分离获得线虫，制成临时或永久玻 片，显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据，依据本标准描述的长针线虫属传毒种类形 态鉴定特征与其基本生物学信息，按系统分类学方法，鉴定其生物学种类。 5仪器和用具 仪器和用具按GB/T24830执行。 6试剂 试剂按GB/T24830执行，分样筛选用300目。 1 GB/T28086—2011 7现场检疫 对苗木、球茎等寄主材料进行检查，注意观察苗未的生长状况、根部为害状，以及是否带介质、王壤 等。重点选取植株矮化、萎缩，根畸形、粗短、侧根消失等症状的苗未及根际介质或土壤，如无可疑症状 则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测 具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。 8实验室检验 8.1线虫分离 线虫分离按GB/T24830执行。 8.2体视显微镜镜检 分离获得的水样在10倍以上体视显微镜检查，观察线虫的形态结构。 8.3标本制作 标本制作按GB/T24830执行。 8.4生物显微镜观察、摄影和测量 应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，重点包括整体形态、齿尖针、前唇区形态、侧器 囊形态、雌虫阴道骨化结构及雄虫交合刺等，并在每张图片上加相应标尺。需观察、测量获得多岐检索 表中各鉴定特征数字代码（参见附录B)，并计算a、b、c和V等值。 9形态鉴定特征 9.1长针线虫属鉴定特征 9.1.1雌虫 虫体细长，热杀死后虫体直到弯成“C”形，有1排～2排侧体孔。头部圆，连续或缩；侧器口小孔 状、不明显，侧器囊袋状。齿尖针长、针状，不高度硬化，齿尖针基部平滑、不分叉，齿托长约为齿尖针长 的三分之二、中等硬化，基部略厚但不呈凸缘状；齿针导环为单环，距头端的距离通常小于2倍头宽，偶 尔位置较后（距头端距离达齿尖针长的40%）；有1个背食道腺和2个腹亚侧腺，背食道腺细胞核位于 背食道腺开口后一段距离、小于腹亚侧腺细胞核；阴门横裂、位于虫体中部，双卵巢对伸、转折。尾短，呈 弓圆锥形，端细圆或宽圆，有几对尾孔。 9.1.2雄虫 长针线虫属部分种类雄虫未发现，雄虫双生殖腺、对伸，后精巢转折，交合刺粗大、向腹面弯，交合刺 顶端部有短的附导片，斜纹交配肌显著、延伸至泄殖腔前儿倍体宽处，泄殖腔区有1对交配乳突（有的种 有2对～3对），在其前有1列腹中交配乳突，最多有20个，有些种的部分腹中交配乳突交错排列成 双排。 长针线虫属与近似属的区别见表1。 2 GB/T 28086—2011 表1长针线虫科各属的主要鉴别特征 线虫种类 鉴定特征 剑线虫属 长针线虫属 类长针线虫属 拟长针线虫属 剑针线虫属 拟剑针线虫属 Xiphinema Longidorus Longidoroides Paralongidorus Xiphidorus Parariphidorus 双环，位 单环，位于 单环，位于 单环，位于 单环，位于 单环，位于 诱导环 于齿尖针 齿尖针前部 齿尖针前部 齿尖针前部 齿尖针后部 齿尖针后部 后部 齿尖针基部 平滑 平滑 平滑或叉状 叉状 叉状 叉状 齿托基部 不呈凸缘状 不呈凸缘状 不呈凸缘状 凸缘状 凸缘状 凸缘状 小裂缝状或 宽横裂 侧器口 孔状 横裂缝状 横裂缝状 宽横裂缝状 孔状 缝状 漏斗状至倒 漏斗状至 侧器囊 袋状 袋状 袋状 倒马镗状 马状 倒马状 背食道腺 小，位于背 小，位于背 小，位于背 小，位于背 小，位于背 大，紧接 食道腺开口后 食道腺开口后 食道腺开口后 食道腺开口后 核大小及其 食道腺开口后 背食道腺 位置 一段距离 一段距离 -段距离 段距离 一段距离 开口 9.2长针线虫属传毒种类形态鉴定特征（参见附录B和附录C) 9.2.1阿普尔长针线虫（Longidorusapulus Lamberti,1977) 雌虫虫体细长（5.1mm～9.1mm），热杀死后呈"C”字形；唇区扁平，有轻微缢缩，唇区宽度 14um~17um，虫体前端至诱导环的长度27um～34μm；侧器囊大多对称二裂；齿尖针弱，长度为 91μm~112μm，齿托较长60μm～88μm；尾部呈圆锥形。雄虫稀少。 9.2.2Longidorusarthensis Brown,1994 雌虫虫体细长（5.1mm～7.6mm），热杀死后虫体弯曲呈“C”形；唇区钝圆，有轻微缢缩，唇区的宽 度大约为16um；侧器囊大而明显，存在二裂，延伸到口腔到导环距离的三分之二处；尾部钝圆锥形，尾 长约为肛门处体宽。雄虫有发现，交合刺典型矛形。 9.2.3浙狭长针线虫（LongidorusattenuatesHooper，1961) 雌虫虫体细长（5.2mm～7.5mm），热杀死后，虫体后半部形成稍大的弯曲，成"C”形。头部扁平， 稍阔，有明显缢缩，缢缩处体宽为导环处体宽四分之三。侧器囊大，基部对称二裂，延伸到口腔到导环距 离的二分之一，侧器囊几乎围绕着头部，侧器孔很小；齿尖针细长，是齿托的2倍长，并与齿托有简单的 交叉；尾部背面凸起，呈锥形，尾长是肛门处体宽的1.5倍～1.75倍。雄虫稀有，交合刺长45μm。侧 附导片末端二裂。 9.2.4短环长针线虫（LongidorusbreviannulatusNorton，1975) 雌虫虫体细长（4.0mm5.9mm），热杀死后常弯曲成"C"形，有时不规则；体细，平均体宽50μm （除尾端部分）；阴门处有轻微突起，阴门孔倾斜；唇区扁平，有缢缩；侧器囊二裂，延伸到几乎接近导环， 侧气孔模糊，位于唇区后部；尾部圆锥形，但在有些成虫尾端有短而宽的突起。雄虫未发现。 3 SAG