ICS97.200.50 CCSY57 中华人民共和国国家标准 GB/T41412—2022 玩具中异噻唑嘛酮类防腐剂的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of isothiazolinone preservatives in toys- High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2022-04-15实施 2022-04-15发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T41412—2022 目 次 前言 1 范围 2 规范性引用文件 术语和定义 原理 4 试剂和材料 5 仪器与设备 6 样品前处理 7 8 测定 结果计算 10 方法定量限· 11 精密度? 12 试验报告 附录A（规范性） 本文件测定的目标物（3种防腐剂）资料 附录B（资料性） 3种防腐剂的总离子流色谱图· 附录C（资料性） 精密度试验结果 GB/T41412—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由中国轻工业联合会提出。 本文件由全国玩具标准化技术委员会（SAC/TC253）归口。 本文件起草单位：深圳市计量质量检测研究院、必维申美商品检测（上海）有限公司、亿科检测认证 有限公司、福建铭塔玩具股份有限公司、北京中轻联认证中心有限公司、上海海关机电产品检测技术中 心、广州海关技术中心。 本文件主要起草人：柯灯明、冯岸红、张曜、胡爱生、兰文清、关春燕、于文佳、蚁乐洲。 1 GB/T41412—2022 玩具中异噻唑啉酮类防腐剂的测定 高效液相色谱-串联质谱法 警示一一使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问 题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件 1范围 本文件描述了玩具中异噻唑嘛酮类防腐剂测定的高效液相色谱-串联质谱法 1，2-苯并异噻唑啉-3-酮（BIT）的测定，其他防腐剂经过验证后可参照本文件进行测定。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 定，内标法定量。 5 5试剂和材料 5.1水：GB/T6682规定的一级水。 5.2甲醇：色谱纯。 5.3防腐剂标准物质：纯度≥95%，附录A给出了MIT，CMIT和BIT的具体信息。 5.4内标物，2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮-D盐酸盐（2-methyl-4-isothiazolin-3-one-dhydrochloridesalt， 简称MIT-d3，CAS号1329509-49-0），纯度≥95%。 5.5内标物，5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮-D（5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one-d，简称CMIT-d， CAS号1329611-34-8），纯度≥95%。 5.6内标物，1，2-苯并异噻唑啉-3-酮-13C（1，2-benzisothiazolin-3-one-13C，简称BIT-13C，CAS号 1329616-16-1)，纯度≥95%。 1 GB/T41412—2022 5.7标准储备溶液：分别准确称取适量的防腐剂标准物质（5.3），用甲醇（5.2）配制成质量浓度均为 100.0mg/L的标准储备溶液。 5.8内标物混合溶液：准确称取适量内标物MIT-d，（5.4）CMIT-d（5.5）和BIT-13C（5.6），用甲醇 (5.2）稀释得到质量浓度分别为1.0mg/L、3.0mg/L、1.0mg/L的内标物混合溶液 5.9标准混合工作溶液：移取适量体积的防腐剂标准储备溶液（5.7）于容量瓶中，用甲醇（5.2）定容至刻 度，得到质量浓度均为10.0mg/L的标准混合溶液。用甲醇（5.2）采用逐级稀释的方法，将标准混合溶 液稀释得到质量浓度为0.0005mg/L、0.001mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L和0.05mg/L 的系列标准混合工作溶液。取系列标准混合工作溶液1.0mL于进样瓶中，加入0.050mL内标物混合 溶液（5.8），混合均匀。 5.10微孔滤膜：有机相，孔径为0.22μm。 6 仪器与设备 6.17 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 6.2超声波提取器。 6.3分析天平：精度0.1mg。 6.47 离心机：转速不低于6000r/min。 6.5 具塞玻璃瓶。 7 样品前处理 7.1 样品提取 准确称取0.1g（精确至0.1mg）样品于25mL具塞玻璃瓶（6.5）中，加人10.0mL甲醇（5.2），置于 超声波提取器（6.2)中，室温下超声提取15min。冷却至室温后，提取液经微孔滤膜（5.10）过滤后待测。 滤后待测。 7.2 测定前样品准备 准确移取1.0mL提取溶液于进样瓶中，并加入0.050mL内标物混合溶液（5.8），混匀后进行测定 8测定 8.1 仪器测定条件 高效液相色谱参考工作条件如下： a） 色谱柱：Cis色谱柱（1.7um，3.0mm×100mm）或相当者； b）柱温：40℃； 流速：0.3mL/min； d) 进样量：5uL； 流动相A为水，流动相B为甲醇，梯度洗脱程序见表1。 2 GB/T41412—2022 表 1 梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 70 30 2.5 40 60 3.0 5 95 5.0 5 S6 6.0 60 40 7.0 70 30 8.0 70 30 质谱参考工作条件如下： a) 电离方式：ESI+； b) 监测模式：多反应监测模式（MRM），监测离子对及相关参数设定见表2，保留时间见附录B； c) 离子源温度：500℃； d) 脱溶剂气流量：800L/h； e) 毛细管电压：3000V。 表 2 化合物监测离子对及相关参数设定 名称 母离子m/z 子离子m/2 锥孔电压/V 碰撞能量/eV MIT 116.1 70.9*,100.9 30 20,20 CMIT 150,1 86.9,134.9 30 30,30 BIT 152.0 109.0*,134.0 30 20,20 MIT-da 119,1 73.9*,103.9 30 20,20 CMIT-d: 153.1 89.9",137.9 30 30,30 BIT-13 Ce 158.0 115.0",140.0 30 20,20 注：带“*”指该离子为定量离子 8.2 定性分析 按上述分析条件（8.1)对标准溶液及样品溶液进行分析，采用特征离子对的相对丰度比和色谱峰的 保留时间（见附录B)进行定性。如果检出的色谱峰的保留时间和标准溶液相一致，并且所选择的监测 离子对的相对丰度比与标准品的离子对的相对丰度比的偏差在规定允许的范围内（见表3），则可认为 样品中含有目标组分。 表3定性判断时相对离子丰度的允许相对偏差 离子相对丰度/% 允许相对偏差/% >50 ±20 20~50 ± 25 10~20 ±30 <10 ±50 3 GB/T41412—2022 8.3 定量分析 采用内标法进行定量分析，以标准工作溶液的浓度为横坐标、化合物定量离子峰面积和内标物峰面 积之比（R）为纵坐标，得到标准曲线回归方程，其线性相关系数应大于0.995，并以此计算样品中的防腐 剂含量。 8.4 平行试验 按照以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，两次测试结果的绝对差值不大于这两个测试值的算 术平均值的15%。 9 结果计算 玩具样品中MIT、CMIT和BIT的含量按式（1）进行计算： M=exvxf .........(1) m 式中： M-样品中防腐剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 样品溶液中防腐剂的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V样品溶液的体积，单位为毫升（mL）； f稀释倍数； m样品的质量，单位为克（g）。 测试结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 10 方法定量限 本文件中MIT，CMIT和BIT的方法定量限均为0.040mg/kg。 11 精密度 本文件方法的精密度试验结果见附录C。 12 试验报告 试验报告至少应给出以下内容： 试样描述； b) 本文件的编号（包括年号）； c) 试验结果； d) 与规定的分析步骤的差异； (a 在试验中观察到的异常现象； f) 试验日期。 4 GB/T41412—2022 附录A （规范性） 本文件测定的目标物（3种防腐剂）资料 3种防腐剂的相关信息见表A.1。 表A.1 3种防腐剂的相关信息 序号 中文名称 英文名称 CAS号 分子式 化学结构图 2-methyl-4-isothiazolin-3-one 2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮 2682-20-4 C,H,NOS (MIT) 5-氯-2-甲基-4-异噻 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one 2 26172-55-4 C,H,CINOS .1 唑啉-3-酮 (CMIT) 1.2-benzisothiazolin-3-one 1,2-苯并异噻唑啉-3-酮 2634-33-5 C,H.NOS 3 (BIT) 5 GB/T41412—2022 附录B （资料性） 3种防腐剂的总离子