ICS 65.020.30 B 43 备案号：30914-2011 四 川 DB51 省 地 方 标 准 DB51/T 1311—2011 山羊人工授精技术操作规程 Technical Regulations for Artificial Insemination in Goat Breeds 2011 - 06 - 27 发布 四川省质量技术监督局 2011 - 07 - 01 实施 发 布 DB51/T 1311—2011 目 次 前 言 ............................................................................... II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语与定义 ........................................................................ 1 3 人工授精前的准备 .................................................................. 1 4 采精 .............................................................................. 2 5 精液品质检查 ...................................................................... 3 6 精液稀释 .......................................................................... 4 7 精液保存与运输 .................................................................... 4 8 输精 .............................................................................. 4 附录A（资料性附录） 山羊人工授精所需器械、用具与药品 ................................ 6 I DB51/T 1311—2011 前 言 本标准附录A为规范性附录。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准发布。 本标准起草单位：西南民族大学 四川省畜禽繁育改良总站 乐至县天龙科技示范园 四川省简阳大 哥大牧业有限公司 自贡市大地农业开发有限公司。 本标准主要起草人：字向东 王永 李键 傅昌秀 马力 付锡三 龚华斌 陈尚永。 II DB51/T 1311—2011 山羊人工授精技术操作规程 1 范围 本标准规范了四川省丘区山羊人工授精中的采精、精液品质检查、精液稀释、输精等操作技术。 本标准适用于四川省丘区山羊配种站点、种羊场、规模化自繁自养羊场（户）开展人工授精。 2 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 人工授精 artificial insemination，AI 采用器械采集公畜的精液，再用器械把经过检查和处理后的精液输入到母畜生殖道内，以代替公母 畜自然交配而繁殖后代的一种繁殖技术。 2.2 精子活率 sperm motility 精液中呈直线前进运动的精子数占总精子数的百分比。 2.3 精子密度 sperm concentration 每毫升精液中所含的精子数。 3 人工授精前的准备 3.1 人工授精室建筑 人工授精室包括采精室和实验室两部分。采精室可以采用敞开棚舍，应宽敞、平坦、安静、清洁、 干燥、背风；实验室应为封闭建筑，包括无菌操作室、准备室、更衣消毒室和人员通道等结构。采精室 和实验室之间设置传递窗，用于传递精液。 3.2 采精种公羊准备 选择健康、性欲旺盛、精液品质优良的良种成年公羊采精。 3.3 种公羊采精调教 利用假台羊采精，对初次参加采精的种公羊进行调教，调教方法如下： ① 将发情母羊的外阴分泌物涂擦到公羊的鼻孔周围，通过气味刺激诱导其爬跨台羊。 1 DB51/T 1311—2011 ② 首先用发情母羊诱导爬跨数次，但不使其交配，等性欲增强后，将发情母羊牵走，让其爬跨假 台羊。 ③ 将待调教的公羊栓系在假台羊附近，让其观看另一头已调教好的公羊爬跨假台羊采精，然后再 诱导其爬跨假台羊。 3.4 台羊准备 一般用健康发情母羊作为台羊，也可以用假台羊。台羊可以人为保定，也可以使用保定架。台羊保 定架尺寸根据台羊体格大小而定。 3.5 器材准备 羊人工授精所需的假阴道、开张器、输精器及各种试剂、药品和其他器材按附录A准备。 3.6 器材消毒 3.6.1 洗涤 先用洗衣粉水浸泡洗刷器械，温水反复冲净后，再用蒸馏水冲洗两遍以上，最后用消毒干净纱布擦 干，即可。 3.6.2 消毒 对假阴道内胎、输精器、开张器、集精瓶、玻璃器皿等，先用70%酒精擦拭或冲洗后，再用灭菌生 理盐水冲洗2次，即可。对毛巾、擦布、金属器械、工作服等，应用高压灭菌锅灭菌消毒。 4 4.1 采精 假阴道安装 操作步骤如下： ① 将消毒好的内胎装入外壳中，光滑面朝向内腔。 ② 将假阴道外壳夹在安装者的大腿之间，使内胎的两端翻卷于外壳两端上，注意使内胎不得扭曲， 内胎的中轴应与外壳中轴重合，然后，用橡皮圈将两端夹紧。 ③ 用75％酒精棉球擦拭消毒内胎壁。 ④ 在假阴道夹层注入50℃左右的温水150ml～180ml，使内胎腔内温度保持在38℃～40℃。 ⑤ 从阴茎进口端开始，在内胎上涂凡士林，深度为假阴道的1/2～1/3。 ⑥ 安装上气门活塞，吹入适量空气，使内胎一端的中央形成“Y”形。 ⑦ 装上集精杯； 4.2 采精 操作步骤如下： ① 准备好台羊，并固定在保定架上或由助手人工固定。 ② 将公羊牵至台羊处，控制2min～3min后再让其爬跨，以提高精液品质。 ③ 采精时，采精员蹲伏在台羊的右侧后方，右手握假阴道，假阴道口部向下，与地面成35度～40 度角。 ④ 当公羊爬跨台羊伸出阴茎时，采精员左手轻托阴茎包皮，将阴茎导入假阴道中，并保持假阴道 与阴茎呈一直线。 2 DB51/T 1311—2011 ⑤ 公羊射精后从台羊身上滑下来时，采精员顺着公羊的动态将假阴道轻轻后移取下，并迅速将集 精杯口向上、放出空气、取下集精杯，盖上盖子，做好标记，送精液处理室检查。 5 精液品质检查 5.1 一般性状检查 正常精液颜色为乳白色，略带腥味、膻味。射精量为 0.5ml～1.2ml。凡带有腐败臭味、红色、绿 色、褐色等不正常颜色的精液不能用于输精。 5.2 精子密度评定 采用显微镜观察法，在 400 倍～600 倍下观察。在载玻片上滴 1 滴原精液（稀释前），加盖玻片， 使精液分散成均匀一薄层，观察并评定。精子密度分为密、中和稀三级，评定标准如下： ① 密：视野中精子数目很多，精子间的空隙不足容纳1个精子的长度，看不清楚各个精子运动的活 动情况。 ② 中：视野中精子数目也很多，但精子间的空隙有容纳1个精子长度的空隙。 ③ 稀：视野中精子稀薄，精子间的空隙超过1个精子长度以上。 用于输精的精子密度应在“中”以上。 5.3 精子活率检查 取1滴精液于载玻片上，盖上盖玻片，置于37℃显微镜恒温台或保温箱内，在400倍～600倍显微镜 下用目测法评定精子活率。评定标准：全部精子都做直线前进运动的评定为1，90%精子的评定为0.9， 依次类推，可将精子活力分为10个等级。 用于输精的精子活率应在0.6以上。 5.4 精子数量测定 采用血细胞计数板法。操作方法与步骤如下： ① 用红细胞吸管吸取精液至0.5刻度处。 ② 再吸入3%氯化钠溶液至101刻度处（即将原精液稀释200倍）。 ③ 用纱布擦去吸管尖端附着的精液，将精液注入到小试管中，充分混匀。 ④ 将稀释好的精液滴于计数板与盖玻片的边缘，使其自然注入并充满计数室。注意不要使精液溢 出盖玻片之外，也不可因精液不足而致计算室内有气泡或干燥之处。 ⑤ 将计数板置于400倍～600倍显微镜下，选择5个大方格计数。 ⑥ 将5个大方格内的精子总数乘以1000万，即为1ml原精液中的精子数。 用于输精的精液的有效精子数应大于或等于7000万个/ml。 5.5 精子畸形率测定 ① ② ③ ④ 以细玻璃棒蘸取精液1滴，滴于载玻片一端，再加1滴～2滴0.9%NaCl溶液。 以另一载玻片的顶端呈35度角，滴于精液滴上，向另一端拉去，将精液均匀涂抹于载玻片上。 用0.5%的龙胆紫酒精溶液染色3min，水洗、候干即可镜检，也可用蓝墨水染色。 镜检：在显微镜下观察精子形态，凡巨型精子、短小精子、双头或双尾精子、头部或尾部弯曲 精子、顶体脱落的精子、有原生质滴的精子等均为畸形精子。查数不同视野的500个精子，计算 出精子的畸形率。输精精液的畸形精子数不得超过15%。 3 DB51/T 1311—2011 6 精液稀释 6.1 常用精液稀释液 6.1.1 生理盐水稀释液 稀释倍数一般不超过2倍。 6.1.2 葡萄糖－卵黄－柠檬酸钠稀释液 在100ml蒸馏水中加入葡萄糖3g、柠檬酸钠1.4g，过滤灭菌，冷却至30℃左右，再加入新鲜卵黄20ml， 混匀后即可。一般稀释倍数为2倍～3倍。 6.1.3 牛奶或羊奶稀释液 用5层～8层灭菌纱布过滤鲜奶，煮沸消毒10min～15min，冷却至30℃左右，取中间奶液作为稀释液。 一般稀释倍数为2倍～4倍。 6.2 精液稀释操作 先在稀释液中加青、链霉素各5万～10万单位，再将定容后的稀释液徐徐加入集精杯中，轻轻摇匀。 稀释时，稀释液与精液的温度要基本一致。 7 精液保存与运输 7.1 常温保存 将稀释好的精液分装在贮藏瓶内，置于室内水中或15℃～25℃的保温瓶内保存。有效保存时间1d～ 2d。 7.2 低温保存 将稀释后的精液分装密封，缓慢降温至0℃～5℃。隔水置于 0℃～5℃的低温环境或冰箱内保存。 有效保存时间2d～3d。 7.3 精液运输 7.3.1 封装 将稀释好的精液注入经过消毒干燥的小试管中，上面覆盖0.5cm的液体石蜡，用橡皮塞塞严管口， 再在试管外裹一层棉花并用纱布包好，贴好标签，注明公羊号、采精时间等。 7.3.2 运输 将装好精液的试管放入加有冰块或冰袋的广口保温瓶中运输。防止运输途中