ICS 11.120.01 B38 DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB35/T 1254—2012 金线莲培育技术规程 2012- 05 - 04 发布 福建省质量技术监督局 2012 - 08 - 05 实施 发 布 DB35/T 1254—2012 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 组培瓶苗培育 ...................................................................... 1 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 5 2 2 2 2 2 3 3 组培苗栽培 ........................................................................ 3 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 6 培养器皿 ...................................................................... 培养基 ........................................................................ 接种操作 ...................................................................... 培养室 ........................................................................ 初代培养 ...................................................................... 继代培养 ...................................................................... 生根培养 ...................................................................... 场地 .......................................................................... 基质 .......................................................................... 移栽 .......................................................................... 栽后管理 ...................................................................... 主要病虫害防治 ................................................................ 采收 .......................................................................... 3 3 3 4 4 5 技术档案 .......................................................................... 5 附录 A（资料性附录） MS 基本培养基配方 ............................................... 7 附录 B（规范性附录） 不同培养阶段植物生长调节剂的组合 ................................ 9 附录 C（规范性附录） 培养基母液配制方法 ............................................. 10 附录 D（资料性附录） 金线莲主要病虫害化学防治方法 ................................... 12 I DB35/T 1254—2012 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由福建省林业厅提出并归口。 本标准负责起草单位：福建省林业科技试验中心。 本标准参加起草单位：明溪县现代农业科技开发中心、福建省金草生物集团有限公司、永安市黄泥 家有限责任公司、永安市农业局、德化县龙盛农林科技有限公司。 本标准主要起草人：陈裕德、汪长水、高小坤、陈春、温成华、陈咏梅、沈绍榕、吴兴明、张淑强、 黄碧华。 II DB35/T 1254—2012 金线莲培育技术规程 1 范围 本标准规定了金线莲培育技术的术语和定义，组培瓶苗培育，组培苗栽培和技术档案等。 本标准适用于金线莲的培育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4285 农药安全使用标准 GB/T 8321 农药合理使用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 组织培养 在无菌人工培养基上，对植物离体器官、组织或细胞以及原生质体进行培养，以形成再生植株或新 的育种材料的生物技术。 3.2 初代培养 将植株上分离下来的离体材料在无菌条件下培养得到可增殖的无菌培养物的培养过程。 3.3 继代培养 初代培养后新增殖的培养物转移到新鲜的培养基上进行培养的过程称继代培养。 3.4 生根培养 继代培养得到芽苗接种到生根培养基上进行诱导生根培养，形成再生植株的过程。 3.5 组培瓶苗 1 DB35/T 1254—2012 通过组织培养过程得到的，尚在组织培养容器（瓶、杯）中生长的植株。 3.6 组培苗 组培瓶苗经炼苗后去除容器、培养基的植株。 4 组培瓶苗培育 4.1 培养器皿 4.1.1 培养器皿选用无色透明、可耐高温高压的玻璃瓶或塑料容器。 4.1.2 培养器皿的洗涤 4.1.2.1 新购进的培养器皿先用浓度 1%的稀盐酸浸泡 12 h，洗刷冲洗后晾干。 4.1.2.2 使用过的培养器皿先在含有洗衣粉等洗涤剂的清水中洗刷干净，用清水冲洗后晾干。 4.1.2.3 内含污染培养物的培养器皿，先进行蒸汽高压灭菌，再打开盖子洗刷冲洗后晾干。 4.2 培养基 4.2.1 基本培养基的选择：基本培养基采用 MS 培养基,具体配方见附录 A。 4.2.2 B。 植物生长调节剂的选择：根据培养阶段的不同，选择不同的植物生长调节剂组合，详情见附录 4.2.3 蔗糖：食用白糖 20 g·L ～30 g·L 。 4.2.4 凝固剂：琼脂或卡拉胶 6.0 g·L ～7.0 g·L 。 4.2.5 酸碱度调节剂：用浓度为 1 mg·L 的氢氧化钠或盐酸溶液调整 pH 值。 4.2.6 培养基配制 -1 -1 -1 -1 -1 4.2.6.1 母液配制：用蒸馏水将不同类别的培养剂成分按所需浓度的 10 倍～200 倍配制成母液,配制 好后置于 2℃～4℃冰箱冷藏,MS 基本培养基母液配制方法见附录 C。 4.2.6.2 培养基制作：将清水（培养基配制总量的 1/3 左右）、糖和凝固剂放入培养基定容器，边加 热边搅拌使其完全溶解；依照培养基配方，按比例吸取母液注入定容器，边搅拌边加清水并定容；用盐 酸或氢氧化钠溶液调整 pH 值至 5.20～5.80。 将制作的培养基分装至培养容器中，封好容器盖，并在 温度达 121℃ 、压力为 0.11 Mpa 的条件下蒸汽高压灭菌 15 min～20 min。 4.3 接种操作 4.3.1 接种室应保持无尘清洁，一般每 3 个月用甲醛和高锰酸钾混合产生的蒸汽熏蒸 1 次，接种前用 紫外线灯消毒 20min；操作人员服装和操作工具在 121℃ 、0.11 Mpa 高压蒸汽灭菌锅中灭菌 25 min。 4.3.2 接种人员进入接种室前，双手要洗净，入室时穿戴经消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。接 种前应先打开超净工作台使之处于工作状态 10min；用手持喷雾器（装有 75%酒精）对超净工作台内壁 2 DB35/T 1254—2012 喷雾和沾有 75%酒精的纱布擦拭操作人员双手和超净工作台内壁。解剖刀、镊子等接种器具在高温消毒 器中 300℃高温灭菌 30s 后,放在灭菌支架上经冷却备用。 4.3.3 在超净工作台上，将消毒好的外植体或继代材料用镊子取出，置于灭菌后的接种盘中进行切割 处理，再用镊子接种入培养基，盖好盖子。 4.4 培养室 保持清洁，一般每3个月用甲醛和高锰酸钾混合产生的蒸汽熏蒸1次；培养室的光源采用日光灯。 4.5 4.5.1 初代培养 外植体选取：选取生长健壮、无病虫害植株的茎尖或带节的茎段为外植体。 4.5.2 外植体的消毒：将外植体用 1％洗洁精溶液清洗，然后置流水下冲洗 30 min 以上；在超净工作 台上用 75%酒精消毒 10 S～30 s,再用 0．1％升汞消毒 5 min～8 min，消毒的时间依据外植体木质化 程度而定；最后用无菌水清洗 5 次～6 次，沥干水分。 4.5.3 外植体培养： 消毒好的外植体接入初代培养基，接种好的外植体置于培养室进行培养。培养室 温度保持在 25℃±2℃。一般先暗培养 7d，然后置于光照强度 1000 Lx～1500 Lx，光照时间 10 h/d 的 培养室中培养。 4.6 继代培养 4.6.1 继代增殖培养通过不定芽途径进行扩繁。 4.6.2 接种时，将丛生芽切割成长度 1.0 cm～1.5 cm 的芽段置于继代培养基上。 4.6.3 继代苗培养室温度控制