DB63 ICS 65.020.99 B40 青 海 省 地 方 标 准 DB 63/ T1079—2012 牦牛人工授精技术操作规程 2012 - 02 - 28 发布 青海省质量技术监督局 2012 - 04 - 01 实施 发 布 DB63/ T1079—2012 前 言 本标准的编制符合GB/T 1.1-2009的要求。 本标准由青海省农牧厅提出并归口。 本标准由青海省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：青海省畜牧总站。 本标准主要起草人：鲍守刚、颜寿东、冯玉瑶、加毛太、韩显明、陈福。 I DB63/ T1079—2012 牦牛人工授精技术操作规程 1 范围 本规程规定了牦牛人工授精术语定义、基本条件、母牛发情鉴定、保定、输精准备、冻精解冻、输 精技术操作，记录。 本规范适用于牦牛人工授精技术操作。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4143 牛冷冻精液 GB/T 5458 液氮生物容器 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本规程。 3.1 冷冻精液 将原精液用稀释液等温稀释、平衡后快速冷冻，在液氮中保存。冷冻精液包括颗粒冷冻精液和细管 冷冻精液。 3.2 人工授精 采用人工授精方法把精液输入发情母牛生殖道内，使其受胎。 3.3 发情鉴定 通过外部观察或直肠把握检查方式确定母牛发情的方法。牦牛以直肠把握检查为重点。 3.4 受胎率 同期受胎母牛数占同期参加输精母牛数的百分比。 3.5 1 DB63/ T1079—2012 繁殖率 同期分娩母牛数占同期应繁殖母牛数的百分比。 4 人工授精点要求 4.1 类型 活动式 利用在夏秋两季草场，操作室为帐篷式，室外要求在夏秋两季草场办公场地，设有边长30米铁丝网 圈1个，供配种母牛使用。 4.2 仪器设备 试验台、桌布、显微镜、10升液氮罐、输精器、塑料外套管、毛巾、脸盆、水桶。洗衣粉、卫生纸、 消毒药品、温度计、量筒、保温箱、干燥箱、热水壶、量杯、脱脂棉、纱布。 5 母牛发情鉴定 5.1 外部观察 通过母牛的外部表现症状和生殖器官的变化判断母牛是否发情和发情程度（见附录A）。 5.2 试情法 将去势公牛或将种公牛进行输精管结扎后放入母牛群内观察发情情况。 5.3 直肠检查 通过直肠检查卵巢，触摸卵泡发育程度，判断发情程度及排卵时间（见附录A）。 6 输精前准备 6.1 器具清洗和消毒 凡是接触精液和母牛生殖道的输精器具都应进行清洗和消毒。金属器械清洗后，置电热干燥箱120 ℃保持１小时，自然冷却待用。塑料制品灭菌，可放置在距离紫外灯下60 cm处照射０.５小时以上。 6.2 冷冻精液的贮存 冷冻精液应浸泡在液氮生物容器液氮中贮存，液氮生物容器应符合GB/T 5458有关规定。包装好的 冷冻精液由一个液氮容器转换到另一液氮容器时，冻精在液氮容器外停留时间不得超过5秒。 6.3 冷冻精液的解冻 从液氮罐中取出细管冷冻精液，棉塞端向下放入38℃－40℃水中，待10秒—15秒后，完全融化，取 出擦干即可，剪去细管精液封口，剪口应正，断面应齐。 6.4 精液质量检查 2 DB63/ T1079—2012 在显微镜下检查直线前进的精子质量合格率达0.3以上的0.3为合格，0.3以下弃之,冷冻精液质量应 符合GB 4143。 6.5 保定 母牛在输精前保定在配种架内,注意安全措施。 6.6 牛体卫生 输精前，用手掏净母牛直肠宿粪后，再用温水清洗母牛外阴部并擦拭干净。 6.7 输精器准备 将剪去封口的细管精液迅速装入输精器管内，输精器进入塑料外套管，管口顶紧外套管中固定圈， 向前推到头，外套管后部与输精器后部螺纹处拧紧，全部结合要紧密备用。 7 输精 7.1 输精时间确定 7.1.1 触摸卵泡法：在卵泡壁薄、满而软、有弹性和波动感明显接近成熟排卵时及时输精。6 小时-10 小时卵泡任未破裂，再输精一次。 7.1.2 两次输精法：母牛接受爬跨后 6 小时-10 小时为第一次输精时间,第二次输精时间为母牛接受爬 夸后 12 小时-20 小时。青年母牛的输精时间宜适当提前 3 小时-6 小时。 7.1.3 直肠把握输精法：输精人员五指并握，呈圆锥型从肛门伸进直肠，动作要轻柔，在直肠内触摸 并握住子宫颈，然后由助手用母指和食指同时打开阴门，输精员将输精器从阴道下口斜上方约 45 度角 向里轻轻插入，双手配合，输精器头对准子宫颈口，轻轻旋转插进，过子宫颈口螺旋状皱壁进入子宫体 到达输精部位。一头母牛应使用一支消毒塑料输精外套管。输精器前端到达子宫体后，在注入精液前略 后退约 0.5cm，把输精器推杆缓缓向前推，通过细管中棉塞向前注入精液。 7.2 输精部位及输精最量 将精液输到接近子宫角间沟分岔部的子宫体内，一次输0.25毫升（一支），一个情期输精两次。 8 妊娠检查 8.1 外部观察 牦母牛妊娠后，经过2个—3个情期后，周期性发情停止，食欲增进，营养状况改善，毛色润泽，性 情变得温顺，行为变安稳。怀孕中后期腹围增大，甚至可观察到胎动，乳房逐渐肿大。 8.2 直肠检查法 输精后三个情期未发情，通过直肠检查子宫角的形状、质地变化来判断是否妊娠。60天后直肠触摸 查出妊娠子宫增大、胎儿和胎膜。通过直肠触摸卵巢。其中一侧卵巢有妊娠黄体，黄体质地柔软、丰满， 顶端触感凸起。 8.3 B 超诊断法 3 DB63/ T1079—2012 利用B超诊断仪可通过探查胎水、胎体或胎心搏动以及胎盘来判断母牛妊娠阶段、胎儿性别以及胎 儿的状态。 9 记录 9.1 记录内容 包括配种母牛编号、畜主、输精时间、输精操作人员、公牛号、品种、精子活力、妊娠检查、产犊 日期，上述内容可用表格的方式记录。（见附录B） 9.2 受胎率 受胎率按式（1）计算 受胎率（%）=同期受胎的母牛数/同期输精母牛数×100．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． （1） 9.3 繁殖率 繁殖率按式（2）计算。 繁殖率（%）=同期产犊母牛数/同期应繁殖母牛数×100．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． （2） 4 DB63/ T1079—2012 AA 附 录 A （资料性附录） 发情鉴定对比表 发情鉴定见表A.1。 表A.1 期别 发情鉴定对比表 黄牛发情初期 牦牛 黄牛发情盛期 （不接受爬跨） 发情初期 （接受爬跨） 牦牛发情盛期 黄牛发情末期 （拒绝爬跨） 牦牛发情末期 母牛兴奋不 安，牟叫，游走， 外部 表现 采食减少，产奶 量降低，追逐、 爬跨其它母牛， 母牛游走减少，其它 发情表现不明 牛爬跨时站立不动、 明显，能接受 显，无牟叫声。 后 肢开张，频 频举 尾，其接受爬跨。 而其它牛爬跨不 有时举尾但不 爬跨，但不站 母牛性情转入平 静，但很少跑开。 接受其它牛爬 跨。 立。 接受，一爬即跑 生殖 器官 变化 粘液减少，浑浊 阴户肿胀、松弛、 充血、发亮，子 牦牛看不见阴 宫颈口微张，有 门外出现的状 稀薄透明粘液流 态。 出，阴道壁潮红。 卵泡 卵巢变软，光滑， 变化 有时略有增大。 粘稠。子宫颈口 子宫颈口红润开张， 阴道壁充血，粘液显 粘液量少而不 紧闭，有少量浓 著增加，流出大量透 明显。 稠粘液，阴唇消 肿起皱褶，尾根 明而黏稠的分泌物。 有时能看见少量 粘液，很少看见 有大量粘液。 紧贴阴门。 不明显 一侧卵巢增大，卵泡 一侧卵巢稍 直径 0.5cm-1.0cm 有增大直 卵泡增大，波动 直检有成熟卵 明显，泡壁由厚 泡突出在卵巢表 变薄。 面。 5 DB63/ T1079—2012 BB 附 录 B （资料性附录） 牦牛配种记录表 牦牛配种记录见表B.1。 表B.1 编号 畜主 （场） 牦牛配种记录表 与配公牛 配种日期 输精员 妊娠检查 产犊日期 犊牛处理 公牛号 品种 备注 精子活力 _________________________________ 6