ICS 65.020 B60 DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB35/T 1233—2011 食用菌菌种活力检测技术规范 Measurement technical regulation of mushroom spawn activity 2011 - 12 - 31 发布 福建省质量技术监督局 2012 - 03 - 15 实施 发 布 福 建 省 地 方 标 准 食用菌菌种活力检测技术规范 DB35/T 1233-2011 * 2012 年 6 月第一版 2012 年 6 月第一次印刷 DB35/T 1233—2011 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的起草规则编写。 本标准由福建省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：福建农林大学、福建省食用菌技术推广总站、福建省农业科学院。 本标准主要起草人：邓优锦、廖剑华、江玉姬、上官舟建、朱坚、肖淑霞、黄志龙、张金文、阮淑 珊、吴小平、温志强、谢宝贵。 I DB35/T 1233—2011 食用菌菌种活力检测技术规范 1 范围 本标准规定了食用菌菌种活力检测技术规范的感官评定、细胞核数量检测、温度胁迫萌发检测、菌 丝再生能力检测评价食用菌菌种活力的方法。 本标准适用于香菇、毛木耳、黑木耳、金针菇、杏鲍菇、真姬菇、双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇的母种、 原种和栽培种。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 12728-2006 食用菌术语 GB/T 19171 双孢蘑菇菌种 GB/T 23599 草菇菌种 NY/T 1846-2010 食用菌菌种检验规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 菌种活力 菌种的生长、繁殖能力。 3.2 高温胁迫 过高温度对生物体所处的生存状态产生的生理机能代谢下降。 3.3 插片法 采用平皿培养菌丝，在菌丝还未萌发时将灭菌的盖玻片与培养基表面成30度角倾斜插入离菌种块约 1cm处的培养基中，待菌丝生长至盖玻片约1/3处时，拔出盖玻片，反面放置载玻片上观察，从而获得可 以在显微镜上观察菌丝生长脉络的一种真菌菌丝显微制片方法。 3.4 高温抑制线 1 DB35/T 1233—2011 食用菌菌种在生产过程中受高温的不良影响，培养物部分区域呈现发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象 与正常菌丝出现的明显界线。 3.5 壁料分离 菌种培养基因收缩而导致与试管壁、菌种瓶、塑料袋等容器壁分开的现象。 3.6 最高温度 食（药）用菌生长发育温度范围的上限。 4 方法与步骤 4.1 抽样 按“NY/T 1846-2010”中5.1和5.2进行抽样。 4.2 感官评定 4.2.1 母种 母种出现下列情况之一，判定菌种活力已减弱： a) 斜面培养基干缩，出现质壁分离； b) 菌丝明显变色或出现暗斑。 4.2.2 原种与栽培种 原种与栽培种出现下列情况之一，判定菌种活力已减弱： a) 菌丝明显变色，菌种变软、大量吐黄水； b) 出现壁料分离； c) 产生高温抑制线； d) 菌种明显失水变轻。 4.3 细胞核数量检测 4.3.1 适宜的食用菌品种 本检测适用于草菇。 4.3.2 细胞核数量测定 采用插片法培养获取待观察菌丝。无菌条件下，在距待测母种接种块1cm～2cm处，原种或栽培种的 中央位置，挑取大小约0.5cm×0.5cm×0.5cm的菌丝块，转接至平板PDA培养基中央（当待测菌种为母种 时，接种块的菌丝面朝上），于菌种最适宜的温度下培养。 取出带菌丝的盖玻片，滴一滴DAPI（4’,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐）染料至载玻片中，并反向盖 上带菌丝的盖玻片，荧光显微镜下随机选取50个视野观察，每个视野随机选1个完整细胞进行细胞核数 量测定，并做好记录。 2 DB35/T 1233—2011 4.3.3 活力评价 4.3.3.1 测定正常菌种菌丝细胞的平均细胞核数量，作为参考系。 4.3.3.2 重复计数 3 次，并与正常菌种进行统计分析，如待测菌种菌丝细胞的平均细胞核数量显著低 于正常菌种，说明该菌种活力减弱。 4.4 高温胁迫萌发检测 4.4.1 处理温度的设定 处理温度等于最高温度减去2℃。 4.4.2 实验步骤 4.4.2.1 取待测菌种，挑取大小约 0.5cm×0.5cm×0.5cm 的菌丝块，转接至 PDA 平板培养基中央，于 处理温度下放置 1 个小时。 4.4.2.2 待测菌种取样位置，母种为距接种块 1cm～2cm 处，原种或栽培种为菌种瓶的中央位置，若待 测菌种为母种，接种块的菌丝面朝上。 4.4.2.3 4.4.3 将处理好的平皿放置菌株最适培养温度培养，每隔 2 小时～3 小时观察一次。 活力评价 测定待测菌种3次，每次3个重复，若萌发时间比正常菌种延长2倍以上，判定待测菌种活力减弱。 4.5 菌丝再生能力检测 4.5.1 栽培基质中菌丝再生能力检测 4.5.1.1 4.5.1.1.1 培养基 木生菌 杂木屑（细）78％、麦麸 20％、糖 1％、石膏 1%，含水量 58%-62%，pH 值自然。 4.5.1.1.2 草生菌 草菇培养基按“GB/T 23599—2009”中 A.2.2的草菇培养基配方，双孢蘑菇的按照“GB 19171—2003” 中B.2.1的双孢蘑菇培养基配方。 4.5.1.2 实验步骤 4.5.1.2.1 取待测菌种，挑取大小约 0.5cm×0.5cm×0.5cm 的菌丝块，转接至装培养料试管上表面中 央，于最适的温度下培养。 4.5.1.2.2 按本标准 4.4.2.2 进行。 4.5.1.2.3 记录萌发时间，当菌丝长至 1cm～2cm 时，在菌丝前缘画线作为生长起始线，记录时间。 4.5.1.2.4 画线后放回培养，当菌丝生长最快的试管即将长满时，在菌丝前缘画终止线，记录时间， 测量起始线与终止线之间的距离，计算菌丝生长速度。 4.5.1.3 活力评价 3 DB35/T 1233—2011 测定待测菌种3次，每次3个重复，若萌发时间或生长速度比正常菌种延长2倍以上，判定待测菌种 活力减弱。 4.5.2 4.5.2.1 搔菌法检测 实验步骤 取待测菌种，按无菌操作要求，用接种铲或接种耙搔除菌种表面（母种斜面、原种或栽培种瓶袋料 面）一薄层培养基，塞回棉花塞，放于适宜的温度下培养，观察其萌发出新菌丝的能力。 4.5.2.2 活力评价 按本标准4.4.3进行。 _________________________________ 4