ICS 65.020 B 16 DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 987—2014 脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测技术规程 Technical criterion for virus detection of virus-free sweet potato seed tuber or seedling 2014-12-30 发布 河南省质量技术监督局 2015-03-01 实施 发 布 DB41/T 987－2014 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语和定义 ........................................................................ 1 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 脱毒组培苗 .................................................................... 扩繁苗 ........................................................................ 脱毒种薯（苗） ................................................................ 原原种 ........................................................................ 原种 .......................................................................... 大田用种 ...................................................................... 允许带毒率 .................................................................... 允许病毒显症率 ................................................................ 1 1 1 1 1 1 2 2 3 检测对象 .......................................................................... 2 4 抽样 .............................................................................. 2 4.1 组培苗抽样 .................................................................... 2 4.2 田间抽样 ...................................................................... 2 5 检测方法 .......................................................................... 2 5.1 5.2 5.3 5.4 6 硝酸纤维素膜酶联免疫吸附测定（NCM-ELISA）检测法 ............................... 指示植物检测法 ................................................................ 聚合酶链式反应（PCR）检测法 ................................................... 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测法 .......................................... 2 3 3 3 脱毒种薯（苗）的检测程序及质量要求 ................................................ 3 6.1 6.2 6.3 6.4 脱毒组培苗 .................................................................... 原原种 ........................................................................ 原种 .......................................................................... 大田用种 ...................................................................... 3 3 3 3 附录A（规范性附录） 硝酸纤维素膜酶联免疫吸附测定（NCM-ELISA）检测法 ................. 4 附录B（规范性附录） 指示植物检测法 .................................................. 6 附录C（规范性附录） 聚合酶链式反应（PCR）检测法 ..................................... 7 附录D（规范性附录） 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测法 ............................ 9 I DB41/T 987－2014 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河南省农业科学院提出。 本标准起草单位：河南省农业科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：张振臣、乔奇、秦艳红、张德胜、王爽、田雨婷、王永江。 II DB41/T 987－2014 脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测技术规程 1 范围 本标准规定了脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测的术语定义、检测对象、抽样、检测方法和脱毒种薯（苗） 的检测程序及质量要求。 本标准适用于脱毒甘薯种薯（苗）的病毒检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 脱毒组培苗 virus-free tissue culture seedling 利用茎尖分生组织培养技术获得的再生组培苗，经检测，确认不含甘薯羽状斑驳病毒（Sweet potato feathery mottle virus，SPFMV） 、甘薯潜隐病毒（Sweet potato latent virus，SPLV）、甘薯 G 病毒 （Sweet potato virus G，SPVG） 、甘薯病毒 2（Sweet potato virus 2，SPV2） 、甘薯褪绿斑病毒（Sweet potato chlorotic fleck virus，SPCFV） 、甘薯褪绿矮化病毒（Sweet potato chlorotic stunt virus， SPCSV）和甘薯卷叶病毒（Sweet potato leaf curl virus，SPLCV）的种苗。 2.2 扩繁苗 propagation seedling 由脱毒组培苗在无菌条件下或者防虫温（网）室内快繁后得到的甘薯苗。 2.3 脱毒种薯（苗）virus-free seed tuber or seedling 由脱毒组培苗经逐代繁殖增加种薯（苗）数量的种薯（苗）生产体系生产出来的种薯（苗）。分原 原种、原种、大田用种三个级别。 2.4 原原种 pre-elite 用脱毒组培苗或扩繁苗在防虫网室内生产出的符合质量要求的种薯（苗）。 2.5 原种 elite 用原原种作种薯，在隔离条件下生产出的符合质量要求的种薯（苗）。 2.6 大田用种 certified seed 用原种作种薯，在隔离条件下生产出的符合质量要求的种薯（苗）。 2.7 允许带毒率 permission virus-carrying rate 各级甘薯种薯（苗）繁殖田中允许携带病毒植株的比率。 2.8 允许病毒显症率 permission virus-symptom rate 1 DB41/T 987－2014 各级甘薯种薯（苗）繁殖田中允许出现病毒病症状植株的比率。 3 检测对象 甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）； 甘薯潜隐病毒（SPLV）； 甘薯G病毒（SPVG）； 甘薯病毒2（SPV2）； 甘薯褪绿斑病毒（SPCFV）； 甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）； 甘薯卷叶病毒（SPLCV）。 4 抽样 4.1 组培苗抽样 4.1.1 脱毒组培苗 每株均应检测。 4.1.2 扩繁苗 随机抽取1%～2%的扩繁苗检测。 4.2 田间抽样 4.2.1 原原种田抽样 2 定植后30 d、60 d、收获前2周，在目测的基础上，采用五点取样法。面积≤0.1 hm ，抽取数量为 2 2 2 200株；0.1 hm ＜面积≤1 hm ，抽取数量为500株；每超出1 hm 面积，划出另一检验区，按本规程规定 的面积取样。每株取上、中、下部叶片1 g～5 g，-20 ℃以下低温保存。 4.2.2 原种田和大田用种田抽样 定植后30 d、收获前两周，在目测的基础上，采用五点取样法。取样方法及样品保存同4.2.1。 5 检测方法 5.1 硝酸纤维素膜酶联免疫吸附测定（NCM-ELISA）检测法 用于检测SPFMV、SPLV、SPVG、SPV2、SPCFV、SPCSV和SPLCV共7种病毒，检测法见附录A。 5.2 指示植物检测法 用于辅助检测SPFMV、SPLV、SPVG、SPV2、SPCFV、SPCSV和SPLCV共7种病毒，检测法见附录B。 5.3 聚合酶链式反应（PCR）检测法 用于检测SPLCV。检测法见附录C。 2 DB41/T 987－2014 5.4 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测法 用于检测SPCSV。检测法见附录D。 6 脱毒种薯（苗）的检测程序及质量要求 6.1 脱毒组培苗 样品同时利用NCM-ELISA、PCR、RT-PCR和指示植物4种方法进行检测，4种方法的检测结果均应为阴 性，即允许带毒率为0。 6.2 原原种 先目测调查样品的病毒显症率，然后利用NCM-