ICS 65.020.30 B 43 DB51 四 川 省 地 方 标 准 DB51/T 1844—2014 獭兔人工授精技术规程 2014 - 09 - 19 发布 四川省质量技术监督局 2014 - 10 - 01 实施 发 布 DB51/T 1844—2014 目 次 前 言 ............................................................................... II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语和定义 ........................................................................ 1 3 采精 .............................................................................. 1 4 精液品质检验 ...................................................................... 2 5 精液稀释 .......................................................................... 3 6 输精 .............................................................................. 4 附录 A（资料性附录） 人工授精室常用器械及药品材料 .................................... 5 附录 B（资料性附录） 公兔精液品质检查登记表 .......................................... 6 附录 C（资料性附录） 常见几种公兔精液稀释液配方 ...................................... 7 附录 D（资料性附录） 母兔输精记录表 .................................................. 8 I DB51/T 1844—2014 前 言 本标准附录 A、B、C、D 均为资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准发布。 本标准起草单位：四川省草原科学研究院。 本标准主要起草人： 余志菊、杜丹、简文素、文斌、傅祥超、郭小林、张凯、刘汉中、汪平、刘 宁、范成强。 II DB51/T 1844—2014 獭兔人工授精技术规程 1 范围 本标准规定了獭兔采精、精液品质检查、稀释、输精的人工授精技术要求。 本标准适用于獭兔的人工授精操作。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 人工授精技术 artificial insemination 指利用器械以人工方法采集公兔的精液，经特定处理后，再输入到发情的母兔生殖道的特定部位使 其妊娠的一种过程。 2.2 台兔 dummy rabbit 用于诱导公兔爬跨、采集精液的活体母兔。 2.3 精子活力 sperm motility 指精液中呈直线运动的精子占精子总数的比例。 2.4 假阴道 artificial vagina 特制的橡胶内胎、橡胶外壳和集精刻度杯组成用于采集公兔精液的一种器械。 3 采精 3.1 公兔选择 选择采精的公兔应符合品种特征，体质结实、生产性能高、生殖器官发育正常，精液品质良好、性 欲旺盛、健康无病。还需根据系谱及后裔进行测定，选择个体育种值高的作为主配公兔。 3.2 3.2.1 采精前准备 假阴道的准备 先将内胎完整放入45 ℃～55 ℃的热水中浸泡3 min～5 min，检查是否有损坏和沙眼。用长柄镊子 夹上75%酒精浸泡的棉球消毒内胎，从内向外旋转，等酒精挥发后，再用生理盐水棉球擦拭冲洗几次。 1 DB51/T 1844—2014 安装假阴道的内胎，夹层内尽量不能有空气。安装时先将内胎装入外壳，并使其光面朝内，两头等长或 集精口处长度短，然后内胎一端翻套在外壳上，另一端也按此法套好，此时注意勿使内胎发生扭转，并 使松紧适度，最后在两端分别套上橡皮圈固定。内胎安装好后，将50 ℃～55 ℃温水注入到假阴道的夹 层内。在采精前，用经消毒的温度计检测假阴道内腔温度，以达39 ℃～42 ℃为宜。温度过高，导致精 子死亡；温度过低，难以引起公兔射精。 3.2.2 采精公兔的准备 将公兔外生殖器脏物冲洗干净，擦干水渍后用消毒清洁的干纱布对外生殖器四周的兔毛清洁。 3.2.3 采精器械的准备 人工授精用的输精器和各种玻璃器皿等见附录A，用高温煮沸消毒。 3.2.4 精液稀释液的准备 配制所需量的稀释液，置于水浴锅中预热至35 ℃。 3.2.5 精液质检设备的准备 调节质检用的显微镜，开启显微镜载物台上恒温板以及预热精子密度测定仪。 3.3 采精程序 将制作好的采精器放入盛有50 ℃左右温水的水桶内加温，将采精用母兔捉入公兔笼内，让其相互 追逐少许时间。采精员左手持37 ℃的集精杯，右手刺激公兔使其爬跨母兔，并固定母兔姿势，左手小 指和无名指护住集精杯伸向母兔两后腿之间，假阴道紧贴于肛门下部，并稍用力托起母兔臀部。当公兔 爬跨、阴茎举起时，适当调整角度和位置，使阴茎顺利插入假阴道；当公兔快速抽动前挺射精倒下后， 将假阴道抽出竖直，片刻后取下集精杯，盖上杯盖，贴上公兔号送往精液处理室。 3.4 采精频率 采精做到定点、定时、定人。种公兔每天可采精1 次～2 次，每两次间隔时间不少于6 h，连续采 精2 d休息1 d，每周采精不超过3 d。 4 精液品质检验 4.1 检验室环境要求 建议检验室室内面积30 ㎡～40 ㎡，采用装有天花板、四周墙面、没有安装窗户的房间，使处理、 存放精液的地方没有阳光直射。检验室安装一台空调，用于控制室内的温、湿度，保障空气流通；安装 供排水系统和水池，便于生产蒸馏水和清洗器具。工作时室内温度保持20 ℃～22 ℃，室内保持卫生干 燥，没有灰尘和杂质。 4.2 4.2.1 外观评定 采精量 精液中如有果冻样凝结物，须用吸管移除后才能直接从集精管的刻度线读出精液体积，一般在0.3 m L～2 m L之间。 2 DB51/T 1844—2014 4.2.2 颜色和气味 正常精液颜色呈乳白色或灰白色，浑浊不透明，有腥味。如精液呈乳黄色或灰黄色并有臭味，说明 有尿液混入，为不合格精液。 4.2.3 PH 值 用PH试纸测定，正常范围在6.8～7.4。 4.3 显微镜检测 4.3.1 精子活力 将载玻片和盖玻片预热到37 ℃。每次采精后，用吸管吸一滴精液在载玻片上，用盖玻片盖上后， 立即在放大400 倍～600 倍的显微镜下于30 ℃～35 ℃左右的环境中检查精子的活力。一般分为5 个等 级：0级，精子不能活动；1级，精子活动能力差，只在原地蠕动；2级，精子活动力一般，只向前曲线 运动；3级，精子活动很好，直线运动；4级，精子活动极好，呈快速直线运动。正常时，3级与4级之和 应超过50 %。新鲜精液活力应在70 %～80 %。 4.3.2 精子密度 用于输精的精子密度必须在”中”级以上。在显微镜下，整个视野中精子彼此间空隙很小，精子的距 离几乎看不到为“密”，所含精子数约在10 亿/m L以上；精子之间的空隙明显，精子间距离超过1 个～ 2 个精子为“中”，所含精子数约在2 亿/m L～10 亿/m L之间；精子分散存在，精子间距离超过3 个 精子为“稀”，所含精子数约在2 亿/m L以下。 4.3.3 精子畸形率 将精液涂成抹片，待自然干燥后，用0.5 %龙胆紫酒精溶液或5 %伊红水溶液染色3 min～5 min。然 后用流水缓缓冲去染色液，候干镜检计数。随机数出500 个或100 个精子，计算畸形精子占精子总数的 比例，要求不超过18 %。 4.4 填表 填写公兔精液品质检查登记表见附录B。 5 5.1 精液稀释 稀释液 稀释液配方参见附录C。配方一，0.9 %生理盐水；配方二，5 %～10 %葡萄糖；配方三，葡萄糖柠檬酸钠-卵黄；配方四，Tris-柠檬酸-果糖-卵黄。生产中常用配方一和配方二的稀释液对精液进行稀 释。稀释液配好后及时贴上标签，标明品名、配制日期和时间、操作员等，配制好的稀释液在1 h后方 可用于稀释精液。稀释液在4 ℃恒温箱中保存，保存时间不超过24 h。 5.2 稀释倍数 精液采集后应尽快稀释，具体稀释倍数可根据精液质量（量、密度、活率）及每次输精母兔只数稀 释3 倍～10 倍。 5.3 等温稀释 3 DB51/T 1844—2014 以精液温度为标准，来调节稀释液的温度，不能反向操作。稀释前需将稀释液加温（如放在水浴锅 内）至33 ℃～37 ℃，使稀释液与精液温度等温。稀释时，将稀释液沿集精杯壁缓慢加人到精液中，然 后轻轻摇动或用消毒后的玻璃棒搅拌，使之混合均匀。 5.4 活力检测 稀释后静置约5 min作检查，活力在60 %以上进行分装。 6 输精 6.1 输精前准备 6.1.1 母兔准备 选择自然发情的母兔先输精后注射促排卵素。常用促排卵素3号，用量0.25 μg～0.5 μg之间，初 配用0.25 μg，以后用量不超过0.5 μg。 6.1.2 输精器 购买专用兔用输精器，输精前须将输精器高温消毒。 6.2 输精方法 输精时需两人操作，一人保定母兔，另一人用生理盐水擦拭母兔外阴部，将消毒、冲洗后的输精器 吸取精液，左手将母兔阴户处皮肤往下按，右手持输精管沿偏向背侧的方向缓慢插入阴道约7 c m～8 c m左右，感觉到有阻力时停止插入，然后退0.5 c m～1 c m，将精液慢慢注入，缓慢抽出输精管或让其 慢慢滑落，拍打母兔臀部，以防精液倒流。 6.3 输精次数及输精量 一般1次，每次输入0.3 m L～0.5 m L精液，输精10 d后进行妊娠检查。 填写母兔输精记录表(见附录D)。 4 DB51/T 1844—2014 AA 附 录 A （资料性附录） 人工授精室常用器械及药品材料 序号 名称 规格 单位 数量 1 显微镜 300 倍～600 倍 台 1 2 天平秤 0.1 g～100 g 台 1 3 酒精 95 %，500 m L