(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210632273.2 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 广州精科生物技 术有限公司 地址 510000 广东省广州市国际生物岛螺 旋四路7号 (72)发明人 李宏　李胜　 (74)专利代理 机构 大连非凡专利事务所 212 20 专利代理师 闪红霞 (51)Int.Cl. C12N 5/09(2010.01) C12M 1/12(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种分级富 集癌细胞及类 器官的方法、 装置 (57)摘要 本发明公开一种分级富集癌细胞及类器官 的方法， 将无消化酶细胞回收液与内含类器官及 散在细胞的水凝胶混合并孵育， 得水凝胶液化 液； 再将含10%胎牛血清的DMEM细胞培养液或磷 酸盐缓冲液与水凝胶液化液混合， 得到水凝胶液 化稀释液； 将水凝胶液化稀释液缓慢倒入置于容 器内的过滤器内并震动过筛， 所述过滤器为多层 筛网竖直间隔排列且由下至上孔径逐层递增； 将 筛网由上至下逐层取出并分别倒扣于内有细胞 培养液的不同容器中， 将滤上物洗脱至细胞培养 液中； 将含有滤上物的细胞培养液离心， 弃上清， 得到癌细胞及类 器官。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 114958755 A 2022.08.30 CN 114958755 A 1.一种分级富 集癌细胞及类 器官的方法， 其特 征在于依次按照如下步骤进行： 步骤1. 将无消化酶细胞回收液与内含类器官及散在细胞的水凝胶按照体积比为1： 15‑20混合， 孵 育1‑2个小时， 得 水凝胶液化液； 步骤2. 再将含10%胎牛血清的DMEM细胞培养液或磷酸盐缓冲液与水凝胶液化液按照 体积比为1： 20 ‑50混合， 得到水凝胶液化稀释液； 步骤3. 将水凝胶液化稀释液缓慢倒入置于容器内的过滤器内并震动过筛， 所述过滤 器为多层筛网竖直间隔排列且由下至上孔径逐层递增， 每层筛网构成独立滤室， 最下层纱 网与容器底部间隔设置， 所述容器内有液面没过顶层筛网的细胞培养液， 所述每层筛网的 孔径均一且分别为10 ‑20 μm、 20‑30 μm、 45‑55 μm、 75‑85 μm、 115‑125 μm、 145‑150 μm及 195‑205 μm； 步骤4. 将筛网由上至下逐层取出， 并分别倒扣于内有细胞培养液的不同容器 中， 将滤 上物洗脱至细胞培 养液中； 步骤5. 将含有滤 上物的细胞培 养液离心， 弃 上清， 得到癌细胞及类 器官。 2. 一种如权利要求1所述分级富集癌细胞及类器官的方法用装置， 其特征在于： 设有 过滤器 （1） ， 所述过滤器 （1） 由竖直排列且可拆卸连接的多个滤室 （2） 构成， 所述滤室 （2） 由 侧壁 （2‑1） 及位于底部的筛网 （2 ‑2） 相接而成， 所述筛网 （2 ‑2） 由下至上孔径逐层递增， 每层 筛网 （2‑2） 的孔径均一且分别为10 ‑20 μm、 20‑30 μm、 45‑55 μm、 75‑85 μm、 115‑125 μm、 145‑150 μm及195 ‑205 μm。 3.根据权利要求2所述分级富集癌细胞及类器官的方法用装置， 其特征在于所述最上 层滤室 （2） 的外 部固定有把手 （3） 。 4.根据权利要求3所述分级富集类器官的方法用装置， 其特征在于所述多个滤室 （2） 之 间螺纹连接 。 5.根据权利要求3所述分级富集癌细胞及类器官的方法用装置， 其特征在于在过滤器 （1） 外设有容器 （4） ， 所述 容器 （4） 下面有底座 （5） 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958755 A 2一种分级富集癌细胞及类器 官的方法、 装置 技术领域 [0001]本发明涉及一种癌细胞及类器官的收集方法、 装置， 尤其是一种分级富集癌细胞 及类器官的方法、 装置 。 背景技术 [0002]类器官 （Organoid） 是一种 在半固态基质凝胶中由具有增殖能力的干细胞、 正常细 胞或肿瘤细胞形成的多细胞三 维 （3D） 立体结构 。 由于类器官在表型和功能上很好地保留了 其来源组织的形态学特点、 生物学功能和分子特征， 且因可  “替身试药”而明显减少不必 要 的实验动物损耗， 规避人体试验的伦理学问题， 故类器官已作为新型离体实验模型用于生 物医学研究和药物研发， 在诸如疾病模型构建及防治、 组织再生、 损伤修复、 器官移植技术 改良、 癌症的药敏筛查和疗效评估、 用药安全性评价等领域有十 分广阔的应用前景。 许多生 物医学研究要求在实验体系内细胞的数量和/或类器官 的数量及体积尽可能均一， 以避免 结果偏差， 使获得的数据具有可靠性、 可重复性， 易于进行高通 量分析。 [0003]现有类器官的构建方法大多是将来源于多能干细胞、 动 物组织和患者标本制成的 细胞悬液接种到内含IV型胶原、 层粘连蛋白、 硫酸肝素蛋白多糖(HSPG)以及多种 生长因子 的Engelbreth ‑Holm‑Swarm (EHS)小鼠肉瘤基底膜提取物胶状物/凝胶中进行体外3D培养 （细胞悬液和凝胶的比例为1： 2）； 3D培养过程中， 细胞在不断分裂增殖形成细胞团 (spheroids)的同时， 还 可通过彼此间的相互作用和信号通讯结为一体， 形成大小不一的类 器官。 类器官随着体积逐渐增长， 会经历从形成、 成长及成熟稳定等动态过程， 处于成熟稳 定期的类器官如继续增大， 其内部细胞可能存在乏氧和营养不良以及由此所致的细胞自噬 和凋亡等问题， 从而进入退化、 衰 老乃至死亡等过程； 另外， 当使用组织进 行类器官培养时， 通常存在多种类型细胞在培养体系内混杂共生的情况。 上述情形给针对某一特定类型细胞 如癌细胞及其类器官的定量分析 （特别是自动化的高通量分析） 造成很大困难， 难以保证上 述医学研究和检测结果的可靠性。 [0004]目前， 已有根据细胞的物理、 生理、 生化、 免疫、 遗传、 分子生物学性状及功能状态 差异进行检测定性或定量的流式细胞分选和基于细胞生物标记物的抗体偶联磁性细胞分 选术， 但只限于 分选单个细胞而非形态何大小各异的类器官； 上述两种方法不仅 操作复杂， 耗时较长， 同时因仪器价格不菲而导致实验成本高， 更重要的是容易造成细胞损伤和细菌 污染， 从而大 大降低离体实验 模型的成功率。 发明内容 [0005]本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题， 提供一种分级富集癌细胞及 类器官的方法、 装置 。 [0006]本发明的技术解决方案是： 一种分级富集癌细胞及类器官的方法， 依次按照如下 步骤进行： 步骤1. 将无消化酶的细胞回收液与内含类器官及散在细胞的基质胶或水凝胶按说　明　书 1/3 页 3 CN 114958755 A 3