(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210654949.8 (22)申请日 2022.06.10 (71)申请人 江苏硕世生物科技股份有限公司 地址 225300 江苏省泰州市药城大道837号 (72)发明人 高杰锋　王萍　李鹏飞　梁蜜　 张桢珍　梁骞　金巍　刘中华　 王国强　 (74)专利代理 机构 上海锻创知识产权代理有限 公司 314 48 专利代理师 陈少凌 (51)Int.Cl. C12N 5/09(2010.01) C12M 3/00(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种减少细胞收集过程中细胞损失的方法 (57)摘要 本发明公开了一种减少细胞收集过程中细 胞损失的方法， 包括如下步骤： 1)在离心容器中 盛装封闭液， 浸泡30 ‑60min后去除封闭液； 2)将 步骤1)处理后的离心容器在30 ‑60分钟内将温度 从4℃‑8℃冷却至 ‑80～‑60℃， 冷冻5 ‑6小时； 3) 对步骤2)处理后的离心容器施加真空0.15 ‑ 0.2bar， 并在 ‑80～‑60℃下将离心容器干燥8 ‑10 小时， 在1 ‑2小时内将温度升至 ‑30～‑20℃并孵 育3‑5小时,然后0.5 ‑1h内温度从 ‑30～‑20℃到 20‑30℃， 孵育3 ‑4小时。利用本发明的方法处理 的离心容器由于事先对离心容器进行封闭预处 理并冻干， 使用时， 可减少实验操作员的实验步 骤， 节省实验耗时， 同时经过冻干处理的离心容 器可室温保存， 利用运输和保存， 更进一步减少 了实验过程中因气泡产生而导 致的细胞损失。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115011559 A 2022.09.06 CN 115011559 A 1.一种减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 1)在离心容器中盛装封闭液， 浸泡3 0‑60min后去除封闭液； 2)将步骤1)处理后的离心容器在30 ‑60分钟内将温度从4℃ ‑8℃冷却至 ‑80～‑60℃， 冷 冻5‑6小时； 3)对步骤2)处理后的离心容器施加真空(0.15 ‑0.2bar)， 并在 ‑80～‑60℃下将离心容 器干燥8‑10小时,在1 ‑2小时内将温度升至 ‑30～‑20℃并保持3 ‑5小时， 然后0.5 ‑1h内温度 从‑30～‑20℃到20 ‑30℃， 孵育3‑4小时。 2.根据权利要求1所述的减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特征在于， 所述封闭 液包括胎牛 血清、 氯化钙、 氯化镁、 消泡剂。 3.根据权利要求2所述的减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特征在于， 所述消泡 剂选自乳化硅油、 环聚二甲基硅氧烷、 高碳醇脂肪酸酯复合物、 聚氧乙烯聚氧丙烯季戊四醇 醚、 聚氧乙烯聚氧丙醇胺醚、 聚氧丙烯甘油醚、 聚氧丙烯 聚氧乙烯甘油醚、 聚二甲基硅氧烷 中的一种或几种。 4.根据权利要求2所述的减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特征在于， 所述消泡 剂的浓度为0.1 ‑50ppm。 5.根据权利要求2所述的减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特征在于， 所述封闭 液的pH为7.0 ‑7.4。 6.根据权利要求2所述的减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特征在于， 所述封闭 液的制备方法包括如下步骤： 在无血清细胞培养基中分别添加胎牛血清、 氯化钙、 氯化镁、 消泡剂， 制备成所述封闭液， 并将其pH调整为7.0 ‑7.4。 7.根据权利要求2所述的减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特征在于， 所述胎 牛 血清的体积浓度为0.1％ ‑10％。 8.根据权利要求2所述的减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 其特征在于， 所述氯化 钙的浓度为0.5 ‑10mM； 所述氯化镁的浓度为1 ‑10mM。 9.一种如权利要求1 ‑8中任一项所述的制备 方法制得的离心容器。 10.如权利要求9所述的离心容器在 细胞收集中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011559 A 2一种减少细胞收集 过程中细胞损 失的方法 技术领域 [0001]本发明涉及医药技 术领域， 具体涉及一种减少收集过程中细胞损失的方法。 背景技术 [0002]目前细胞收集时常常采用离心等方法， 倾倒废液时会 随着上清液倒出很多细胞, 损失大量目标细胞影响了采集效果。 [0003]目前常用的减少细胞过程损失的方法是对实验过程中的器具进行封闭处理， 常用 的封闭液为BSA、 血清等蛋白类物质。 但现在方法存在的问题为： 1、 封闭的处理需要实验操 作员自己配置相关溶液并现场进行操作， 这既增加了实验过程的繁琐程度和 耗时， 还容易 因实验操作员因疏忽没有封闭步骤而对实验结果产生较大误差。 2、 封闭过程中使用的蛋白 类物质会引起后续的实验过程中溶液产生大量气泡， 气泡的产生非常容易导致细胞的损 失。 本技术方案直接对实验所需离心容器进行封闭预处理并冻干， 可减少实验操作员的实 验步骤， 节省实验耗时， 同时经过冻干处理的离心容器可室温保存， 利用运输和保存， 另外 本封闭液中创新性的加入了消泡剂， 更进一步减少了实验过程中因气泡产生而导致的细胞 损失。 发明内容 [0004]本发明提供一种减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 该方法是将离心容器经过 封闭液处理后冻干， 可用于稀有目标细胞的回收实验， 可明显降低 实验过程中离心容器等 装置和试剂起 泡对细胞回收造成的损失， 且本发明 中的装置经冻干后可室温运输和保存。 [0005]本发明提供一种减少细胞收集过程中细胞损失的方法， 包括如下步骤： [0006]1)在离心容器中盛装封闭液， 浸泡3 0‑60min后移去除封闭液； [0007]2)将步骤1)处理后的离心容器在30 ‑60分钟内将温度从4℃ ‑8℃冷却至 ‑80～‑60 ℃， 冷冻5 ‑6小时； [0008]3)对步骤2)处理后的离心容器施加真空(0.15 ‑0.2bar)， 并在 ‑80～‑60℃下将离 心容器干燥8 ‑10小时， 在 1‑2小时内将温度升至 ‑30～‑20℃并保持3 ‑5小时， 然后0.5 ‑1h内 温度从‑30～‑20℃到20 ‑30℃， 孵育3‑4小时， 备用。 [0009]所述封闭液包括胎牛 血清、 氯化钙、 氯化镁、 消泡剂。 [0010]所述消泡剂选自乳化硅油 、 环聚二甲基硅氧烷、 高碳醇脂肪酸酯复合物、 聚氧乙烯 聚氧丙烯季戊四醇醚、 聚氧乙烯聚氧丙醇胺醚、 聚氧丙烯甘油醚、 聚氧丙烯聚氧乙烯甘油 醚、 聚二甲基硅氧烷中的一种或几种。 [0011]所述消泡剂的浓度为0.1 ‑50ppm。 [0012]所述封闭液的pH为7.0 ‑7.4。 [0013]所述封闭液的制备 方法包括如下步骤： [0014]在无血清细胞培养基中分别添加胎牛血清、 氯化钙、 氯化镁、 消泡剂， 制备成所述 封闭液， 并将其pH调整为7.0 ‑7.4。说　明　书 1/7 页 3 CN 115011559 A 3