文库搜索
切换导航
首页
频道
首页
批量下载
SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3674—2013 凤仙花坏死斑病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Impatiens necrotic spot virus 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3674—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局 本标准主要起草人:李晏、丁元明、张巧萍、寸东义、邓裕亮、曹云华、杜宇、刘忠善、和捷 行业标准信息服务平台 SN/T3674—2013 凤仙花环死斑病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了凤仙花坏死斑病毒检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境活体植物材料,包括无性繁殖材料、组培苗和苗木中凤仙花坏死斑病毒的检疫 与鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 中文名:凤仙花坏死斑病毒 学名:Impatiens necrotic spotvirus 缩写:INSV 分类地位:布尼亚病毒科(Bunyaviridae),番茄斑萎病毒属(Tospouirus)。 INSV的血清学特性和分子生物学特征(参见附录A)是检疫鉴定该病毒的主要依据。 业标准信 4 仪器设备、用具和试剂 4.1仪器 电子天平(0.0001g)、高压灭菌锅、制冰机、涡旋振荡器、高速冷冻离心机、超低温冰箱、微波炉、 酶标仪、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像系统、实时荧光PCR仪。 4.2用具 可调式微量移液器(2μL、10μL、100μL、200μL、1000μL)及相应的无RNase吸头、无RNase离心 管、PCR管、酶联板和研钵等。 4.3试剂 去离子水或蒸馏水应符合GB/T6682中的三级水的要求,超纯水应符合GB/T6682中一级水的 要求。 所用试剂为INSVDAS-ELISA检测试剂盒、Trizol、DEPC、液氮、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、乙醇、 M-MLV反转录酶、TaqDNA聚合酶、DNA分子量标准、溴化乙锭、琼脂糖、溴酚蓝等。除有特殊说明 外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。没有INSVDAS-ELISA检测试剂盒的,血清学试剂的配制方法 见附录B,分子生物学试剂配制见附录C。 1 SN/T 3674—2013 5检疫鉴定方法 5.1双抗夹心酶联免疫吸附检测(DAS-ELISA) 性对照和空白对照,阴性对照为同样处理的健康组织汁液,空白对照为样品抽提缓冲液。 具体操作步骤见附录B。 5.2分子生物学检测 注:实际检测中,可视实验室条件选用以下两种方法中任意一种进行。 5.2.1巢式RT-PCR检测 提取样品的总RNA,以RNA为模板反转录合成cDNA,然后以cDNA为模板进行PCR扩增,再将 同时设阴性对照、阳性对照和空白对照,阴性对照为同样处理的健康组织汁液,空白对照为超纯水。 具体操作步骤见附录C。 5.2.2实时荧光RT-PCR检测 提取样品的总RNA,以RNA为模板反转录合成cDNA,然后以cDNA为模板进行实时荧光PCR 检测。同时设阴性对照、阳性对照和空白对照,阴性对照为同样处理的健康组织汁液,空白对照为超 纯水。 具体操作步骤见附录D。 行业标 6 结果记录与判定 6.1结果记录 DAS-ELISA检测记录各检测反应孔的光密度值,巢式RT-PCR检测有电泳结果照片,实时荧光 RT-PCR应有扩增曲线等原始数据。 6.2结果判定 6.2.1样品经DAS-ELISA检测为阴性时,判定样品为凤仙花坏死斑病毒阴性。 6.2.2样品经DAS-ELISA检测为阳性、巢式RT-PCR或实时荧光RT-PCR检测结果为阴性时,判定 样品不携带凤仙花坏死斑病毒。 6.2.3样品经DAS-ELISA检测为阳性、巢式RT-PCR或实时荧光RT-PCR检测结果为阳性时,判定 样品携带凤仙花坏死斑病毒。 7样品保存 经检验确定携带风仙花坏死斑病毒的样品应保存在适合的条件下以备复核。种子保存在干燥条件 下,其他的组织样品(如叶片等)保存在一20℃冰箱中,有条件的保存在一80℃冰箱中更好。做好登记 和标记工作。 2
SN-T 3674-2013 凤仙花坏死斑病毒检疫鉴定方法
文档预览
中文文档
13 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助1.5元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共13页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助1.5元下载
本文档由
SC
于
2023-03-15 12:29:03
上传分享
举报
下载
原文档
(1.6 MB)
分享
给文档打分
您好可以输入
255
个字符
网站域名是多少( 答案:
github5.com
)
评论列表
暂时还没有评论,期待您的金玉良言
热门文档
GB-T 25068.1-2020 信息技术 安全技术 网络安全 第1部分:综述和概念.pdf
GB-T 33573-2017 集装箱安全智能锁阅读器通用技术规范.pdf
GB-Z 24294.1-2018 信息安全技术 基于互联网电子政务信息安全实施指南 第1部分:总则.pdf
GB-T 18488.2-2015 电动汽车用驱动电机系统 第2部分:试验方法.pdf
GB/T 40212-2021 工业机器人云服务平台分类及参考体系结构.pdf
GB-Z 20986-2007 信息安全技术 信息安全事件分类分级指南.pdf
GB-T 41774-2022 法庭科学 爆炸装置鉴定规程.pdf
T-CEC 716—2022 火力发电厂智能热网供热服务规范.pdf
T-CASME 845—2023 电饭煲及电压力煲聚四氟乙烯不粘表面性能通用要求.pdf
GB-T 19596-2017 电动汽车术语.pdf
DB23-T 3226—2022 湿地鸟类生物多样性监测技术规程 黑龙江省.pdf
JR-T 0002-2016 银行卡自动柜员机(ATM)终端技术规范.pdf
YD-T 3813-2020 基础电信企业数据分类分级方法.pdf
DL-T 1998-2019 感应滤波变压器成套设备使用技术条件.pdf
DB11-T 1258-2015 清洁生产评价指标体系 洗衣业 北京市.pdf
T-ACEF 105—2023 公民绿色低碳行为温室气体减排量化指南 行:骑行.pdf
JG-T118-2018 JGT118-2018建筑隔震橡胶支座.pdf
T-CEC 711.22—2022 电工装备供应商数据采集及接口规范 第22 部分:机器人.pdf
GB-T 28535-2018 铅酸蓄电池隔板.pdf
GB-T 25068.4-2022 信息技术 安全技术 网络安全 第4部分:使用安全网关的网间通信安全保护.pdf
1
/
3
13
评价文档
赞助1.5元 点击下载(1.6 MB)
回到顶部
×
微信扫码支付
1.5
元 自动下载
官方客服微信:siduwenku
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
享优惠, 办会员
每年仅需
99
元(可开发票 无限下载)
加客服微信扫描如下二维码 咨询
×
分享,让知识传承更久远
×
文档举报
举报原因:
×
优惠下载该文档
免费下载 微信群 欢迎您
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。