文库搜索
切换导航
首页
频道
首页
批量下载
SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2343—2009 菜豆荚斑驳病毒检疫鉴定方法 Quarantine identification of bean pod mottle virus 行业标准信息服务平台 2009-07-07发布 2010-01-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T23432009 前 言 本标准的附录B、附录C、附录D为规范性附录,附录A为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫 局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局 本标准主要起草人:廖富荣、陈青、沈建国、郑耘、林石明、陈红运、郭琼霞、黄蓬英、王宏毅、吴媛, 游源浅、虞。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T2343—2009 菜豆荚斑驳病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了菜豆英斑驳病毒检疫鉴定的程序和方法。 本标准适用于可能携带菜豆荚斑驳病毒的大豆、菜豆等种子、苗木等植物繁殖材料的检疫鉴定,也 适用于介体昆虫中该病毒的检疫鉴定。 2原理 2.1分类地位 菜豆荚斑驳病毒(Beanpodmottlevirus)属于豇豆花叶病毒科(Comoviridae)、豇豆花叶病毒属 (Comovirus)的成员。可以分为亚组I和亚组Ⅱ两个亚组。相关资料参见附录A。 英文缩写:BPMV 2.2血清学特性 BPMV具有很强的免疫原性,制备的多克隆抗体可以检测大豆叶片、种子、草本寄主植物和介体昆 虫中的病毒。 2.3分子生物学特性 BPMV是一种正链RNA病毒,其基因组由两条正链RNA-1(约3.6kb)和RNA-2(约6.0kb)组 成,分别包裹在两个直径为28nm的等轴多面体粒体中。RNA-1编码5个复制所需的蛋白,RNA-2编 码一个推导的细胞间运动蛋白和两个外壳蛋白。根据其基因组序列可以设计用于分子检测的特异性引 物和探针,用来该病毒的特异性检测。 BPMV所在的豇豆花叶病毒属的种划分标准是: a)大外壳蛋白(Coatprotein,CP)的氨基酸序列同源性小于75%; 聚合蛋白酶的氨基酸序列同源性小于75%; ) 在可能的成分间没有假重组; 业标准信息服务平台 d) 抗原反应有差异。 3 主要仪器设备与试剂 3.1 主要仪器设备和用具 微量研磨仪; 酶标仪; 洗板机; 微量天平(感量:0.001g); -PCR仪; 电泳仪; 一水平电泳槽; 凝胶成像仪; 高速冷冻台式离心机; 一 水浴槽; pH计; 各种量程的可调移液器(1000μL、200μL、20μL、2μL); SN/T2343—2009 各种吸头(1000μL、200μL、20μL、2μL); —96孔酶标板; 离心管(1.5 mL、0.6 mL、0.2 mL)。 3.2主要试剂 主要试剂和缓冲液见附录B和附录C。 4检测样品的制备 4.1检测样品 将送检样品制备为血清学或分子生物学检测鉴定的检测分样品。对每批送检样品进行症状检查, 挑选具有褐色或黑色斑驳症状的种子(从种脐开始),或者选取具有斑驳、皱缩、褪绿等症状的叶片。 4.2DAS-ELISA和IC-RT-PCR检测样品的制备 种子样品:选取一定量的种皮作为检测分样品(如0.5g~1.0g),在液氮中充分研磨,回温后按比 例加人样品提取缓冲液继续研磨[通常1:(5~10)]。 叶片样品:选取一定量的叶片作为检测分样品(如0.5g~1.0g),在液氮中充分研磨,回温后按比 例加人样品提取缓冲液继续研磨(通常1:10)。 把研磨后的样品转移到5mL离心管中,8000r/min离心5min,上清液作为DAS-ELISA和IC RT-PCR检测提取液。 注:提取液在3h内使用,否则保存在4℃中。 4.3RT-PCR检测样品的制备 称取表现症状的0.1g叶片、种子等样品在液氮中充分研磨后,提取RNA。 5检测与鉴定 5.1DAS-ELISA检测 DAS-ELISA检测应设置对照,用健康的植物组织作阴性对照,用感染BPMV的植物组织作阳性对 照,用样品提取缓冲液作空白对照。其中,阴性对照的种类和材料(如种子或叶片)应该尽量与所检测样 品相一致。 具体操作过程见附录B。当使用商业性检测试剂盒时,参照试剂盒说明进行操作。 5.2RT-PCR检测 RT-PCR检测应设置对照,用健康的植物组织作阴性对照,用感染BPMV的植物组织作阳性对照, 用ddH20作空白对照。 具体操作过程见附录C。 5.3IC-RT-PCR检测 IC-RT-PCR检测应设置对照,用健康的植物组织作阴性对照,用感染BPMV的植物组织作阳性对 照,用ddH2O作空白对照。 具体操作过程见附录D。 5.4序列测定 将PCR产物回收后,进行克隆、测序,或者直接测序,测序可由生物公司完成。把测序所得到的核 苷酸序列与已知的BPMV相应序列进行比对,如果与已知的BPMV相应序列相一致则判定为BPMV, 不一致则判定为非BPMV。 6结果判定与记录 6.1结果判定 当DAS-ELISA检测结果呈阳性、同时IC-RT-PCR或RT-PCR检测结果呈阳性时,则判定为 检出BPMV; 2
SN-T 2343-2009 菜豆荚斑驳病毒检疫鉴定方法
文档预览
中文文档
12 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助1.5元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共12页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助1.5元下载
本文档由
SC
于
2023-03-15 12:28:45
上传分享
举报
下载
原文档
(1.6 MB)
分享
给文档打分
您好可以输入
255
个字符
网站域名是多少( 答案:
github5.com
)
评论列表
暂时还没有评论,期待您的金玉良言
热门文档
GB-T 20984-2007 信息安全技术 信息安全风险评估规范.pdf
T-SLEA 1011.1—2023 实验室设计与建设技术规范 第1部分:通用技术要求.pdf
GB-T 17445-2022 铸造磨球.pdf
GB-T 36275-2018 专用数字对讲设备电磁兼容限值和测量方法.pdf
T-AHPCA 021—2021 聚乳酸可降解口罩.pdf
GB-T 8905-2012 六氟化硫电气设备中气体管理和检测导则.pdf
T-CI 153—2023 人工智能驱动的制造业产品生命周期价值链管理优化技术规范.pdf
NY-T 3990-2021 数字果园建设规范 苹果.pdf
CY-T 101.8-2014 新闻出版内容资源加工规范 第8部分%3A图书加工.pdf
GB-T 42583-2023 信息安全技术 政务网络安全监测平台技术规范.pdf
SC-T 8012-2011 渔业船舶无线电通信、航行及信号设备配备要求.pdf
T-SSACE 018—2022 成都市回弹法检测泵送混凝土抗压强度技术标准.pdf
GW0013-2017 国家电子政务外网 政务云安全要求.pdf
T-CESA 1180—2021 政务APP技术指标评价规范.pdf
T-JSDL 1—2017 高处作业吊篮施工安全管理规程.pdf
GB-T 36137-2018 中空纤维超滤膜和微滤膜组件完整性检验方法.pdf
DB4401-T 184—2022 文化和旅游市场主体信用评价规范 广州市.pdf
T-CCMI 10—2020 热锻冷锻联合成形驻车棘 轮技术条件.pdf
T-ZGKSL 010—2023 重组胶原蛋白透皮吸收测定方法.pdf
GB-T 14844-2018 半导体材料牌号表示方法.pdf
1
/
3
12
评价文档
赞助1.5元 点击下载(1.6 MB)
回到顶部
×
微信扫码支付
1.5
元 自动下载
官方客服微信:siduwenku
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
享优惠, 办会员
每年仅需
99
元(可开发票 无限下载)
加客服微信扫描如下二维码 咨询
×
分享,让知识传承更久远
×
文档举报
举报原因:
×
优惠下载该文档
免费下载 微信群 欢迎您
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。