ICS 67.040 X 04 中华人民共和国国家标准 GB/T 37492—2019 粮油检验 谷物及其制品 水溶性膳食纤维的测定 酶重量法 Inspection of grain and oilsDetermination of soluble dietary fibre in cereals and cereals productsEnzyme gravimetric method 2019-12-01实施 2019-05-10发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T37492—2019 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家粮食和物资储备局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC270)归口。 本标准起草单位：农业农村部谷物及制品质量监督检验测试中心（哈尔滨）。 本标准主要起草人：单宏、苏萍、杜英秋、马永华、陈国友、程爱华、王乐凯。 GB/T37492—2019 粮油检验谷物及其制品 水溶性膳食纤维的测定 酶重量法 1范围 本标准规定了酶重量法测定谷物及其制品水溶性膳食纤维的原理、试剂和材料、仪器和设备、分析 步骤、结果计算和精密度要求。 本标准适用于谷物及其制品中水溶性膳食纤维的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T5490粮油检验一般规则 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 谷物及制品试样在缓冲溶液及高温高压作用下水解，通过用热稳定的α-淀粉酶使样品凝胶，过滤， 再通过蛋白和淀粉葡萄糖苷酶对样品进行消化，去除蛋白质和淀粉，以不能消化的残渣计重，除去灰 分为水溶性膳食纤维。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂应为分析纯，试验用水应符合GB/T6682中二级水的规定。 4.1 无水乙酸钠（CH.CO,Na）。 无水磷酸氢二钠（Na2HPO） 4.3 磷酸二氢钠(NaH,PO4·H,O)。 4.4 乙酸(CH,CO,H²)。 4.5 无水乙醇(CH,CH,OH)。 4.6 丙酮(CH:COCH）。 4.7 氢氧化钠(NaOH)。 4.8 盐酸（HCI)。 4.9 蛋白酶。 4.10 α-淀粉酶（从猪胰脏提取的VI-B型）。 4.11 淀粉葡萄糖苷酶。 4.12 玻璃棉。 4.13 32.0mol/L缓冲液。 4.13.1乙酸溶液（2.0mol/L）：取115mL乙酸（4.4），加人700mL水，混勾后用水定容至1L。 4.13.2 乙酸钠溶液（2.0mol/L）：称取164.00g无水乙酸钠（4.1），溶于水，移人1L容量瓶中，稀释至 1 GB/T37492—2019 刻度。 4.13.3乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH~4.5）：将40mL2.0mol/L乙酸溶液（4.13.1）与40mL2.0mol/L 乙酸钠溶液（4.13.2)混合均匀。 4.14磷酸盐缓冲液。 4.14.1磷酸氢二钠溶液（0.1mol/L）：称取14.20g无水磷酸氢二钠（4.2），溶于水，移人1000mL容量 瓶中，稀释至刻度。 4.14.2磷酸二氢钠溶液（0.1mol/L）：称取13.80g磷酸二氢钠（4.3），溶于水，移人1000mL容量瓶 中，稀释至刻度。 4.14.30.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH~7)：将61mL0.1mol/L磷酸氢二钠溶液（4.14.1)与39mL 0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（4.14.2）混合均匀。 4.15蛋白酶溶液： 称取5.00g蛋白酶（4.9），溶解于100mL磷酸盐缓冲液（4.14.3）中，混合15min。在1500×g离 心10min，然后用含有玻璃棉（4.12)的玻璃过滤。每日制备并冷藏，于0℃～5℃冰箱保存。酶的 活性及判定标准见附录A。 4.16α-淀粉酶溶液： 称取5.00gα-淀粉酶（4.10）溶解于100mL磷酸盐缓冲液（4.14.3）中，混合15min。1500×g离心 10min，然后用含有玻璃棉（4.12）的玻璃过滤。每日制备并冷藏，于0℃～5℃冰箱保存。酶的活 性及判定标准见附录A。 4.17淀粉葡萄糖苷酶： 称取5.00g淀粉葡萄糖苷酶（4.11），溶解于100mL磷酸盐缓冲液（4.14.3）中，混合15min。在 1500Xg离心10min，然后用含有玻璃棉（4.12）的玻璃埚过滤。每日制备并冷藏，于0℃～5℃冰箱 保存。酶的活性及判定标准见附录A。 4.1880%乙醇溶液： 取800mL无水乙醇（4.5），置1L容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 4.19氢氧化钠溶液（1mol/L)： 称取4.00g氢氧化钠（4.7），溶于水，移入100mL容量瓶中，稀释至刻度。 4.20盐酸溶液（1mol/L）： 取8.3mL盐酸（4.8），置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 5仪器和设备 5.1 5.2 分析天平：感量0.01g、0.0001g。 5.3烘箱：105℃±2℃。 5.4马弗炉：525℃土5℃。 5.5水浴锅：100℃±1℃。 5.67 高压灭菌器 5.7酸度计。 5.8具塞三角瓶：250mL。 5.9具塞磨口试管：50mL。 5.10埚式耐热玻璃滤器：容量60mL,孔径40μm。预处理：于耐热玻璃滤器中，铺1g~3g玻 璃棉（4.12），移至烘箱内，105℃烘4h，取出置干燥器中冷却至室温，备用。 5.11回流冷凝装置。 2 GB/T37492—2019 5.12抽滤装置：由抽滤瓶、抽滤垫及水泵组成。 6分析步骤 6.1试样制备 取适量试样磨粉，全部过孔径为1mm（20目）的筛，混匀。置于样品盒中室温保存。 6.2试样测定 6.2.1称样 准确称取试样0.5g（精确至0.0001g），置50mL具塞磨口试管中。如果试样的脂肪含量超过 10%，则需要先脱脂再进行测定。 6.2.2水解 加人2mL缓冲溶液（4.13.3），混匀，置于120℃1.3×105Pa高压灭菌器中水解60min。 6.2.3淀粉酶酶解 加人100μLα-淀粉酶溶液（4.16），加塞，置于60℃土1℃水浴锅中酶解消化30min。然后将经过 酶处理的试样倒人玻璃滤器中，抽滤，用50mL试管收集滤液，用10mL热水冲洗滤器，将所有残留颗 粒无损失地转移至滤器中，再用5mL热水冲洗，洗液并入上述滤液 6.2.4调整pH 在滤液中加人4mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（4.13.3），用氢氧化钠溶液（4.19）或盐酸溶液（4.20），调 滤液pH至5.2。 6.2.5淀粉葡萄糖苷酶酶解 加人50μL淀粉葡萄糖苷酶（4.17)，搅拌均匀，加塞，置于60℃土1℃水浴锅中酶解消化30min。 6.2.6蛋白酶解 加人20μL蛋白酶溶液（4.15），搅拌均匀，加塞，置于60℃土1℃水浴锅中酶解消化30min。 6.2.7沉淀 将滤液转移至250mL三角瓶中，加人无水乙醇（4.5），使乙醇与试样液的体积比为4：1。混匀，加 塞，静置60min，促使沉淀生成。 6.2.8洗涤 将经过沉淀处理的试液倒入处理后玻璃滤器中，抽滤，用80%的乙醇溶液（4.18）清洗三角瓶，将所 有残留颗粒无损失地转移至滤器中，用20mL80%的乙醇溶液清洗滤渣2次，20mL的丙酮清洗2次， 弃去滤液。 6.2.9烘干 将玻璃滤器置于105℃士2℃烘箱内烘干3h，取出，置于干燥器中，冷至室温，称量ml（精确至 0.000 1 g) 。 3