ICS 67.050 CCS X 69 中华人民共和国国家标准 GB/T 41219—2021 酿酒酵母和乳酸克鲁维酵母的 鉴定方法 Method for identification of Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces lactis 2022-07-01实施 2021-12-31发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T41219—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC64）提出并归口。 光）有限公司、安琪酵母股份有限公司、山东圣琪生物有限公司。 本文件主要起草人：孟镇、周世伟、周芳梅、刘明、郑国斌、易勇、武竹英、吴李娣、孙雅芳、张继祥、 郭新光、钟肖琼、朱永兵、孟庆祥、赵学文、张媛媛 1 GB/T 41219—2021 酿酒酵母和乳酸克鲁维酵母的 鉴定方法 1范围 本文件规定了酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）和乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyceslactis）的 鉴定原理、鉴定方法和鉴定结果表述。 本文件适用于酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）和乳酸克鲁维酵母（Kluyueromyceslactis）的 种水平鉴定。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB 4789.1 食品安全国家标准食品微生物学检验总则 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法 3术语和定义 3 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp:碱基对(basepair) DDBJ:日本DNA数据库(DNAData Bank of Japan) DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid) dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxy-adenosinetriphosphate) dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxy-cytidinetriphosphate） dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxy-guanosinetriphosphate） dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate) dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxy-thymidinetriphosphate） dUTP：脱氧尿苷三磷酸（deoxy-uridinetriphosphate) EB：溴化乙锭（Ethidiumbromide) EDTA:乙二胺四乙酸ethylene(diamine tetraacetic acid) EMBL：欧洲分子生物学实验室（TheEuropeanMolecularBiologyLaboratory） PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction） Taq：水生栖热菌（thermusaquaticu) SIC 1 GB/T 41219—2021 Tris：三羟甲基氨基甲烷[tris（hydroxymethyl）aminomethane] YM:酵母麦芽(YeastMalt) YPD：酵母浸出粉陈葡萄糖（YeastExtractPeptoneDextrose） 26SrDNA：26S核糖体脱氧核糖核酸（26Sribosomaldeoxyribonucleicacid) 5鉴定原理 5 获得酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）和乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyceslactis）菌种纯培养 物后，采用表型试验和聚合酶链式反应（PCR）方法相结合的方式鉴定 6 鉴定方法 6.1 表型试验 根据酵母菌株的培养形态、生理生化特征等，与分类系统对照，得到菌株的分类信息，酿酒酵母 （Saccharomycescerevisiae）和乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyceslactis）表型试验按照附录A的方法鉴 定，也可按照自动微生物鉴定系统等方法进行鉴定 6.2 PCR方法 获得待鉴定菌种纯培养后，提取待鉴定菌种的基因组DNA，并对目标序列进行扩增（26SrDNA D1/D2区序列），将扩增产物纯化后进行测序，并将测序得到的DNA序列与已有核酸序列数据库（如 GenBank、EMBL、DDBJ等）中已知参考序列进行同源性搜索比对，得到菌株的分类信息，酿酒酵母 （Saccharomycescerevisiae）和乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyceslactis）26SrDNAD1/D2序列分析 （PCR方法）按照附录B的方法鉴定，也可使用其他自标序列进行鉴定 7鉴定结果表述 根据菌株的核酸序列、形态特征观察和生理生化特征，对照通用的鉴定系统，确定待鉴定菌株的分 类地位。菌种名称采用国际命名规则，使用属名和种加词的拉丁词，并附中文译名，有异名时应同时 标注。 2