ICS 67.120 B 51 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 33108—2016 海参及其制品中海参皂苷的测定 高效液相色谱法 Determination of sea cucumber glycosides in sea cucumber and sea cucumber products- Highperformanceliquid chromatography 2016-10-13发布 2017-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T33108—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。 本标准起草单位：青岛市产品质量监督检验研究院、中国海洋大学。 本标准主要起草人：薛长湖、李昭勇、樊燕、刘小芳、武千钧、杨洁。 I GB/T33108—2016 海参及其制品中海参皂苷的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了海参及其制品中海参皂苷含量的高效液相色谱测定方法。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T30891水产品抽样方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 喹诺糖 quinovose 6-脱氧葡萄糖6-Deoxy-D-gulcose 分子式C，H12O，，相对分子质量164.16。 3.2 海参皂苷 Fsea cucumber glycosides 由羊毛留烧衍生物和低聚糖组成的三菇皂苷化合物，其中喹诺糖为其稳定的特征性单糖。 4原理 样品经乙醇提取、正丁醇萃取得到海参皂苷，再经三氟乙酸水解，水解液中喹诺糖与1-苯基-3-甲 基-5-吡唑啉酮（PMP)进行衍生反应，产物经C18色谱柱分离，高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定 量，以诺糖含量标示样品中海参皂苷的含量。 试剂和材料 5 除另有说明外，所用试剂均为分析纯试剂。 5.1水为符合GB/T6682规定的一级水， 5.2甲醇(CH;OH)：色谱纯。 5.3 乙腈(CH,CN)：色谱纯。 5.4 乙醇(CH,CH,OH)。 1 GB/T33108—2016 5.5 正丁醇[CH，（CH2)2CH,OH]。 5.6 三氯甲烷（CHCI）：色谱纯。 5.7 氢氧化钠（NaOH)。 5.8 盐酸（HCI）。 5.9 磷酸二氢钾（KH,PO,）。 5.10 三氟乙酸(CF;COOH)。 5.11 64℃)溶解制成饱和溶液，冰水混合物冷却，析出晶体，抽滤洗涤晶体，重复结晶一次。 5.12 喹诺糖标准品：纯度≥98.0%，CAS号7658-08-4。 5.13 乙醇溶液（60%）：量取60mL乙醇.加40mL水，混匀。 5.14 盐酸溶液（0.3mol/L）：量取2.5mL分析纯盐酸（5.8），用水稀释并定容至100mL。 5.15 三氟乙酸溶液（2mol/L）：称取22.8g三氟乙酸（5.10），用水稀释并定容至100mL。 5.16 氢氧化钠溶液（4mol/L）：称取16.0g氢氧化钠（5.7），用水稀释并定容至100mL。 5.17 氢氧化钠溶液（0.3mol/L）：称取1.2g氢氧化钠（5.7），用水稀释并定容至100mL。 PMP衍生剂溶液（0.5mol/L）：称取8.71g重结晶后的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP)（5.11）， 5.18 用甲醇溶解并定容至100mL。4℃保存，有效期1个月。 5.19喹诺糖标准储备液（324mg/L）：称取喹诺糖标准品（5.12）3.24mg，用水溶解并定容至10mL。 4℃密封保存，有效期1个月。 12.96mg/L，19.44mg/L，25.92mg/L，32.4mg/L的喹诺糖系列标准工作液，当天配制，现用现配， 5.210.05mol/L磷酸盐缓冲溶液：称取6.80g磷酸二氢钾（5.9），溶于约900mL水中，用氢氧化钠溶 液（5.16）调节pH至5.1~5.3，用水定容至1L，0.45μm滤膜过滤，现用现配。 5.22磷酸盐-乙腈溶液：取乙腈（5.3)220mL，用0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液（5.21）稀释至1000mL， 用氢氧化钠溶液（5.16）调节pH至5.2。 6仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器 6.2 分析天平：精度0.01mg。 均质机。 6.3 6.4 涡旋振荡器。 6.5 高速万能粉碎机。 6.6 旋转蒸发仪。 6.7 恒温水浴。 6.8 微孔滤膜：0.45μm。 6.9 反应管：15mL，螺口，带聚四氟乙烯衬垫。 6.10 5mL容量瓶。 6.11 5mL安瓶。 6.12 10 mL具塞试管。 7测定方法 7.1抽样 产品抽样按GB/T30891的规定进行。 2