ICS 67.050 B 04 中华人民共和国国家标准 GB/T 33807—2017 玉米中转基因成分的测定 基因芯片法 Detection of genetically modified components in maize- Gene chip method 2017-12-01实施 2017-05-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 33807—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由全国生物芯片标准化技术委员会（SAC/TC421）提出并归口。 本标准主要起草单位：四川华汉三创生物科技有限公司、国家农业标准化监测与研究中心（黑龙 江）、广东产品质量监督检验研究院、黑龙江省粮油卫生检验监测站 本标准主要起草人：黄广平、彭丽萍、余之蕴、张金龙、王志强、王勇强、孔鲁裔、魏民伟、张春红、 尹志坚、王海宽 GB/T 33807—2017 玉米中转基因成分的测定 基因芯片法 1范围 本标准规定了玉米及玉米加工产品中转基因成分的检测方法。 Cry1Ab)抗虫玉米中转基因成分的定性检测，也适用于玉米加工产品中转基因成分的定性检测，本标准 规定的转基因成分最低检测限量是0.1%。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.3转基因产品检测 核酸提取纯化方法 GB/T19495.6转基因产品检测 基因芯片检测方法 GB/T19495.7 转基因产品检测 抽样和制样方法 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 GB/T19495.1、GB/T19495.6界定的术语和定义适用于本文件。 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BAR：来源于杆菌Bacillusamyloliquefaciens草丁麟乙酰转移酶基因（phosphinothricinacetyl transferase gene) bp：碱基对（basepair) CaMV35S-P：来自于花椰菜花叶病毒的35S启动子（Promoterfromcauliflowermosaicvirus） CaMV35S-T：来自于花椰菜花叶病毒的35S终止子（Terminationsequencefromcauliflowermo saic virus) CrylAb：苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白CrylAb基因（BacillusthuringiensisInsecticidaltoxin CrylAb gene) CrylA105：苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白CrylA105基因（BacillusthuringiensisInsecticidaltoxin CrylA105 gene) 1 GB/T33807—2017 dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosinetriphosphate） dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidinetriphosphate） dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinetriphosphate) DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid） dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidinetriphosphate） dUTP：脱氧尿苷三磷酸（deoxyuridinetriphosphate） EPSPS：5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶（5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphatesynthase） FMV35S-P：玄参花叶病毒35S启动子LpromoterfromFigwortmosaicvirus（FMV35S) Ivrl：玉米转化酶I基因［Zeamaysinvertase（Ivrl）gene] NC:阴性对照（Negative control) NOS-3'：胭脂碱合成酶基因终止子（Termination sequenceofthenopaline synthasegene) PAT：草丁麟乙酰转移酶基因（phosphinothricinN-acetyltransferasegene） PC:阳性对照（Positivecontrol) Taq酶：来自于栖热水生菌的DNA聚合酶（ThermusaquaticusDNAPolymerase) UNG酶：尿嘧啶-N-糖基化酶（uracilN-glycosylase) 4防污染措施 检测过程中防止交叉污染的措施应按照GB/T19495.2的规定执行。 5抽样与制样 抽样与制样方法应符合GB/T19495.7的相关规定。 6原理 待检样品经DNA模板提取和核酸定量，采用多重PCR扩增体系，扩增其中可能含有的转基因玉 米转基因特异性扩增序列。PCR扩增产物与固定有目标转基因特异性探针的基因芯片进行杂交后，检 测结果可以用肉眼直接判断，或用芯片识读仪对杂交芯片进行扫描并判定结果。 7试剂与标准品 7.1试剂 除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。 7.1.1玉米转基因检测膜芯片法试剂组分应符合7.1.3～7.1.22的规定。 7.1.2试剂组分规格和存放条件参见附录A。 7.1.3PCR反应使用的引物序列应符合表1的规定。 2