ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T18643—2021 代替GB/T18643—2002 鸡马立克氏病诊断技术 Diagnostic techniques for Marek's disease 2021-04-30发布 2021-11-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T18643—2021 目 次 前言 引言 范围 缩略语 3 临床诊断 病毒分离 琼脂免疫扩散试验检测 5 PCR检测 荧光定量PCR(q-PCR）检测 7. 8 综合判定 附录A（规范性附录）病毒分离用溶液配制 附录B（规范性附录） 琼脂免疫扩散试验用溶液配制 附录C（规范性附录）PCR检测用引物、反应条件及溶液配制 12 附录D（规范性附录）α-PCR检测用引物、探针和反应条件 15 GB/T18643—2021 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T18643—2002《鸡马立克氏病诊断技术》。本标准与GB/T18643—2002相比主 要技术变化如下： 修改了鉴别诊断部分的描述（见3.4，2002年版的3.4）； 一增加了病毒分离检测方法（见第4章，附录A）； 一增加了PCR检测方法（见第6章，附录B)； 一增加了荧光定量PCR检测方法（见第7章，附录C)。 本标准的修订参考了OIE《陆生动物诊断实验和疫苗标准手册》（2017版），并结合国内外技术研究 新成果，与国际先进技术保持一致。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心。 本标准主要起草人：刘长军、龚振华、张艳萍、路平、王笑梅、李阳、高玉龙、祁小乐、李凯、王志亮。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T18643—2002。 SZAC 1 GB/T18643—2021 引言 鸡马立克氏病（Marek'sdisease，MD)是一种鸡的高度传染性、以淋巴细胞增生为特征的肿瘤性疾 病，由鸡疱疹病毒2型（Gallid herpesvirus2，GaHV-2），即鸡马立克氏病病毒（Marek'sdiseasevirus， MDV)引起。MD一般发生于3周龄以上的禽只，多发生于12周龄～30周龄。MD可引起多种严重的 病症，其中淋巴组织增生是最常见也是最重要的一种。经典型MD主要侵害神经组织，死亡率很少超 过10%~15%，可持续数周至数月。急性型MD可使发病鸡内脏器官产生淋巴瘤，发病率一般为10%~ 30%，暴发流行时发病率可高达70%。死亡率可能在数周内迅速增加，然后死亡停止，也可能在数月内 保持稳定的死亡率，并逐渐下降。目前，最常见的是产生广泛内脏器官淋巴瘤的急性型MD。 MD在临床诊断上容易与鸡的其他肿瘤性疾病，禽白血病（Avianleukosis，AL)和禽网状内皮组织 增生病（Reticuloendotheliosis，RE），发生混。一般需要通过流行病学和病理组织学进行鉴别诊断。 MD可通过活疫苗免疫预防，免疫属于非清除性免疫，不能清除病原，也不能阻止环境中MDV野毒的 感染和感染鸡排毒。由于MD疫苗普遍应用，以及疫苗的自身特点，临床上MD疫苗毒株的接种和野 毒株的感染情况复杂，需要实验室诊断技术进行确诊 从感染鸡组织中分离MDV可用于该病的检测。通常选用从抗凝血样中分离的淋巴细胞、肾细胞 或脾细胞悬液作为分离病毒用的材料，也可以用羽髓组织浆液作为MDV分离材料。细胞悬液或羽髓 组织浆液可接种鸡肾细胞（Chickenkidneycells，CKC）、鸭胚成纤维细胞（Duckembryofibroblast， DEF）或鸡胚成纤维细胞（Chickenembryofibroblast，CEF）进行病毒分离。应用琼脂免疫扩散试验 （Agargelimmunodiffusion，AGID)对羽髓MDV抗原进行血清学检测，可以确定MDV感染。AGID 是检测抗体最常用的方法，然而由于MD疫苗毒株也可以刺激机体产生相应的抗体，抗体的检测对于 MD的临床诊断仅具有参考价值。PCR（Polymerasechainreaction，PCR）方法可以用于检测MDV， PCR法还可以鉴别MDV血清I型野毒株和疫苗毒株。 Ⅱ