SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3483—2013 松江鲈鱼的物种鉴定方法 PCR 方法 Identification protocolfor Trachidermus fasciatusPCR 行业标准信息服务平台 2013-03-01发布 2013-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3483—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局 本标准主要起草人：徐彪、赵玉然、岳志芹、张太翔、郑小龙、赵巍。 行业标准信息服务平台 SN/T 3483—2013 松江鲈鱼的物种鉴定方法 PCR方法 1范围 本标准规定了松江鲈鱼物种鉴定PCR方法的技术规范。 本标准适用于松江鲈鱼的种质鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 Ct值cyclethreshold 荧光信号由本底进人指数增长期时拐点所对应的实时荧光定量PCR循环次数。 3. 2 扩增曲线 amplificationcurve 在实时荧光定量PCR反应中，模板被扩增，实时荧光定量PCR产物经过线性增长期、指数增长期 以及平台期三个阶段，实时荧光定量PCR产物的量随时间的变化而得到的曲线， 4技术原理 本实验是利用松江鲈鱼细胞色素b（Cytochromeb,Cytb）基因的保守性与特异性设计引物与探 针，建立实时荧光定量PCR方法。该方法是在常规PCR的基础上，加人一条特异性的荧光探针。探针 为一段募核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个萍灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的 荧光信号被淬灭基团吸收；实时荧光定量PCR扩增时，Taq酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解，使 报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可以接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链， 特异性强、灵敏度高的优点。 5试剂和材料 5.1实验用水 应符合GB/T6682的规定。 1