ICS 65.020.30 B 41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7224—2017 鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增 (RT-LAMP）检测方法 Detection method by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification for springviraemia of carpvirus 行业标准信息服务平台 2017-06-12发布 2017-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 SC/T 7224—2017 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业部渔业渔政管理局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。 本标准起草单位：全国水产技术推广总站、深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局、暨 南大学食品安全与研究院 本标准主要起草人：郑晓聪、贾鹏、李清、王津津、余卫忠、何俊强、于力、刘莹、兰文升、史秀杰、刘、 秦智锋、石磊。 行业标准信息服务平台 I SC/T7224—2017 鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP检测方法 1 范围 本标准给出了鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP)检测的技术原理，规定了试 剂和材料、器材和设备、操作步骤及结果判断。 本标准适用于鲤春病毒血症病毒的初筛检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件， GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T15805.5鱼类检疫方法第5部分：鲤春病毒血症病毒（SVCV) GB/T18088出入境动物检疫采样 SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AMV酶：AMV逆转录酶（avianmyelobastosisvirusreversetranscriptase) Bst酶：BstDNA聚合酶（大片段)[BstDNAPolymerase(largefragment)] DEPC：焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate） dNTP：脱氧核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate） EDTA：乙二胺四乙酸（ethlenediaminetetraaceticacid) PBS：磷酸盐缓冲溶液（phosphatebuffersaline） RT-LAMP：逆转录环介导等温扩增（reversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplifica- tion) SVCV：鲤春病毒血症病毒（springviraemiaof carpvirus） 4技术原理 本标准根据SVCV(参见附录A中A.1)基质蛋白基因设计了4条引物（参见附录B)特异性识别 基因组中的6个区域。在AMV酶和链置换Bst酶的作用不，63℃恒温扩增60min，即可实现SVCV核 酸扩增。而后，在扩增反应后加入显色液，即可通过观察颜色变化判定结果 5试剂和材料 5.1水：符合GB/T6682中一级水的规格。 5.2DEPC水：配制方法见附录C中C.1或购买商品化试剂 5.3磷酸盐缓冲液（PBS)：配制方法见C.2或购买商品化试剂。 5.4Trizol试剂：商品化试剂，4℃保存。 5.5 5三氯甲烷：分析纯，避光常温保存。 5.6异丙醇：分析纯，使用前预冷至一20℃。 1