ICS 65.020.30 B 41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7204.5—2020 对虾桃拉综合征诊断规程 第5部分：逆转录环介导核酸 等温扩增检测法 Diagnostic protocols for taura syndrome of penaeid shrimp- Part 5: Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification 行业标准信息服务平台 2020-08-26发布 2021-01-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 SC/T7204.5—2020 K 品标准 前业 全国 SC/T7204—2007《对虾桃拉综合征诊断规程》拟分为如下部分 第1部分：外观症状诊断法； 第2部分：组织病理学诊断法； 食典通 第3部分：RT-PCR检测法； 第4部分：指示生物检测法； 第5部分：逆转录环介导核酸等温扩增检测法； 本部分为SC/T7204.1的第5部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由农业农村部渔业渔政管理局提出。 本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。 本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所 本部分主要起草人：张庆利、黄健、万晓媛、徐婷婷、梁艳、邱亮、桑松文、杨冰、李晨。 行业标准信息服务平台 SC/T 7204.5—2020 对虾桃拉综合征诊断规程第5部分：逆转录 环介导核酸等温扩增检测法 1范围 本部分给出了对虾桃拉综合征病毒逆转录环介导核酸等温扩增检测法所需试剂和材料、器材和设备、 操作步骤和结果判定的要求。 本部分适用于对虾桃拉综合征的初筛检测 2规范性引用文件 PUBL 下列文件对于本文件的应用是必不①的。 期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用 SC/T 7204.3 007 对虾桃拉 金行诊断 3缩略语 下列缩略语适用 于 Bst酶：Bs DNA聚合B社 dNTP:脱 dcoxyribomhdlayside M-MLV M-MLV 增evers RT-LAMP rans plification) Lionloopsmecate an TSV:桃拉 合征病 irus 4试剂和材料 4.1除非另有说明， 的水。 4.2引物TSV 20 200 引物TSV PIGGA AT 引物TSV-F AAT C TAG ACG TTC CAG T-3',20 μmol) 2℃ 引物TSV-BIP:5 TTTOC A ATTGAYTACGTT C CTA CCA TGA GTI AAI CTA-3',20 μmol/L 0℃保存 4.310XIsothermal Amplil 为1×工作液时内含20mmol/LTris-HCl， 50 mmol/L KCl,10 mmol/L (NH),s 冲液。 4.4dNTP（各20mmol/L)：含dATP、dTTP、dCTP、dGTP各20mmol/L,按附录A中A.1的规定执 行，一20℃保存，避免反复冻融。 4.5甜菜碱（Betaine）：浓度5mol/L，按A.2规定执行，一20℃保存，避免反复冻融。 4.6 硫酸镁（MgSO,）：浓度100mmol/L，一20℃保存。 4.7 M-MLV逆转录酶：酶浓度200U/uL，一20℃保存，避免反复冻融。 4.81 BstDNA聚合酶：酶浓度8U/uL，一20℃保存，避免反复冻融。 4.92 核酸染料：20×EvaGreen，商品化试剂，4℃保存，或其他等效核酸染料。 4.10 阳性对照为已知感染TSV且RT-PCR结果显示明显阳性的对虾组织，一80℃保存。 4. 11 阴性对照为已知未感染TSV且RT-PCR结果显示阴性的对虾组织，一80℃保存。 1