ICS 67.040 B 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 19495.22004 转基因产品检测 实验室技术要求 Detection of genetically modified organism and derived products- General requirements for laboratories 2004-04-13发布 2004-04-13实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T19495.2—2004 目 次 前言 III 范围 规范性引用文件 2 术语、定义和缩略语· 转基因产品检测的工作流程 测试样品的要求 转基因产品检验实验室的分区要求 实验室质量控制和质量保证 8 实验室清洁 9有毒、有害及废弃物质的处理 10安全防护.. 附录A（资料性附录) 防止RNase污染的措施. 附录B（资料性附录） 溴化乙锭溶液和含溴化乙锭琼脂糖凝胶块的净化处理 参考文献· GB/T19495.2—2004 前 #言 GB/I19495《转基因产品检测》为系列标准： GB/T19495.1—2004 转基因产品检测 通用要求和定义； GB/T19495.22004 转基因产品检测 实验室技术要求； GB/T19495.3—2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法； GB/T19495.4—2004 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法； ——GB/T19495.5—2004 转基因产品检测 核酸定量PCR检测方法； GB/T19495.6—2004 转基因产品检测 基因芯片检测方法； —GB/T19495.7—2004 转基因产品检测 抽样和制样方法； -GB/T19495.82004 转基因产品检测 蛋白质检测方法。 本部分的附录A、附录B为资料性附录。 本部分由国家认证认可监督委员会提出并归口。 负责起草、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、卫生部临 床检验中心、浙江大学和广西大学参加起草 本部分主要起草人：朱水芳、覃文、陈红运、黄文胜、潘良文、曹际娟、赵文军、李金民、董海涛、 李有志。 本部分系首次发布的国家标准。 II GB/T19495.2—2004 转基因产品检测 实验室技术要求 1范围 GB/T19495的本部分规定了转基因产品检测实验室总体技术要求和检验质量控制的基本要求 本部分适用于以核酸扩增技术和免疫学方法检测转基因产品的实验室，也适用于基因工程等其他 相关领域的实验室。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T19495的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法（eqvISO3696：1987） GB11930操作开放型放射性物质的辐射防护规定 GB/T15481一2000检测和校准实验室能力的通用要求 GB/T19495.1—2004转基因产品检测通用要求和定义 ASTME1342一1997用冷冻、冷冻干燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素 以及动物和植物组织的保存 3术语、定义和缩略语 GB/T19495.1确立的以及下列术语和定义适用于GB/T19495的本部分。 3.1术语和定义 3. 1. 1 关键试剂 Jcritical reagents 在使用前经已知样品测试过的试剂。 3. 1. 2 阳性标准物质 positive reference materials 由认可机构制备、有溯源性的含有不同浓度待测靶序列的物质。 3.1.3 阴性标准物质 negativereferencematerials 由认可机构制备、有溯源性的不含有待测靶序列的物质。 3.2缩略语 DEPCDiethylpyrocarbonate，二乙基焦碳酸盐 UNG酶UracilN-glycosylase,尿嘧啶DNA-糖基化酶。 4转基因产品检测的工作流程 转基因产品检测的工作流程为：实验室样品到样验收（确定是否具备检验的基本条件）一→混样→获 取测试样品→测试样品的制备（待检状态）→核酸和（或）蛋白等目标物质的提取→PCR实验（包括扩增 和产物分析）和（或）蛋白质检测→结果判定→结果表述，出具检验报告。 1 GB/T19495.2—2004 5测试样品的要求 转基因产品检测所接收的待检样品应置于原始包装袋（或容器）中，不能接收从其他检测、检验等分 出来的样品，以避免样品间交叉污染。 6转基因产品检验实验室的分区要求 6.1一般要求 6.1.1设施和环境要求 用于转基因产品检测实验室的设施和环境要求应符合GB/T15481一2000中的规定。 用于核酸检验的转基因产品检测实验室，有条件的宜在所分隔的各工作区域设置缓冲间，缓冲间的 压力为负压（或上设抽风装置），与其相连的工作间为正压，工作间与缓冲间之间宜安装磁性连锁装置。 规定设置实验室的压力。非实验人员不应进人各实验工作区。 不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室，并有明显的标志，各区间不能直通。各区之间 如果是紧密相连，需安装物品传递舱。 每个工作区域的顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254nm，安装数量为每20m²安装一支40W 的紫外灯，灯与地面的距离不宜超过2.0m0.1m。 6.1.2工作顺序 所有实验操作应在规定的区域进行，待检样品的流动应遵照转基因产品检测工作流程的顺序，严格 按单一方向进行。 6.2实验室工作区域的设置及要求 6.2.1核酸检验区 6.2.1.1试剂购存和准备区 a）主要功能：原装试剂和配制试剂的贮存，所有试剂的配制与分装。 b）工作区域的压力要求：未设缓冲间的试剂贮存和准备区，工作区域为正压。 注意事项：当试剂经质检合格后，应将其分装贮存备用，贮存试剂的分装体积根据通常在实验 室内一次测定所需的扩增反应数决定。用于扩增的试剂应冰冻贮存 6.2.1.2样品制备区 a）主要功能：实验室样品的混样和测试样品的制备。 b）工作区域的压力要求：未设缓冲间的样品制备区，工作区域为负压或减压，可安装排风系统， c) 注意事项：此区应远离其他实验操作区；粉碎样品时的器血应单独使用，所用的器具在使用前 应经过彻底清洗并高压消毒，防止交叉污染；称取的测试样品应加盖后再移至样品核酸制 备区。 6.2.1.3核酸制备区 a) 主要功能：核酸的提取纯化与贮存：核酸含量的测定：测试样品DNA的保存 b）工作区域的压力要求：未设缓冲间的核酸制备区，工作区域为负压或减压，可安装排风系统 c) 注意事项：已纯化的核酸应保存于一20℃或一80℃，避免反复冻融；阳性和阴性标准物质DNA 可调整至常用的使用浓度后分装并冷冻保存。 6.2.1.4扩增区 a）主要功能：PCR扩增反应体系的配制和模板的加入，核酸扩增 b）工作区域的压力要求：未设缓冲间的扩增区，工作区域为负压或减压，可安装排风系统。 c） 注意事项：严格限制无关人员出入并减少在本区内走动：加样应在超净工作台（生物安全柜）内 进行，超净工作台的气流方向宜选择垂流式；巢式PCR的第二次加样必须在此区进行。 2