ICS 67. 180. 10 X 31 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 18932.26—2005 蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑 残留量的测定方法 液相色谱法 Method for the determination of metronidazole,ronidazole and dimetridazole residues in honey- Liquid chromatographic method 2005-08-01实施 2005-02-04发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T18932.26—2005 前言 GB/118932本部分的附录A、附录B为资料性附录。 本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本部分由中华全国供销合作总社归口。 本部分起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局 本部分主要起草人：庞国芳、刘永明、曹彦忠、贾光群、范春林、张进杰、李学民、石玉秋 本部分系首次发布的国家标准。 GB/T18932.26—2005 蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑 残留量的测定方法 液相色谱法 1范围 GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的液相色谱测定 方法。 本部分适用于蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定。 本部分的方法检出限：甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑均为0.010mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性 (GB/T 6379—1986,neqISO 5725:1981) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 试样中硝基咪唑类药物残留用乙酸乙酯提取，提取液蒸干后，用水溶解，经过OasisHLB固相萃取 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙睛：色谱纯。 4.3乙酸乙酯：色谱纯。 4.4无水乙酸钠：分析纯。 4.5冰乙酸：优级纯。 4.6甲醇+水（5+95）：量取5mL甲醇与95mL水混合。 4.7乙酸盐缓冲溶液：0.82g/L。称取0.82g无水乙酸钠，用800mL水溶解，用冰乙酸调节pH至 4.3,用水稀释至1L。 4.8洗脱剂：甲醇+乙腈+乙酸盐缓冲溶液（40+6+54）。 4.9OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理， 保持柱体湿润。 4.10BAKERBONDCarboxylicAcid固相萃取柱或相当者：500mg，3mL。使用前用5mL乙酸乙酯 预处理，保持柱体湿润。 1 GB/T18932.26—2005 4.11甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑标准物质：纯度≥98%。 哒唑、二甲硝咪唑标准物质，分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。储备液可在温度低于4℃冰 箱中保存二个月。 4.13甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑混合标准工作溶液：根据需要吸取适量甲硝哒唑、洛硝哒唑、二 甲硝咪唑标准储备溶液，用流动相稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液应现用 现配。 5仪器 5.1液相色谱仪：配有紫外检测器。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。 5.3 液体混匀器 5.4固相萃取真空装置。 5.5振荡器。 5.6 具塞玻璃离心管：50mL。 5.7 真空泵：真空度应达到80kPa。 5.8离心机。 5.9旋转蒸发器 5. 10 ）样品管：5mL。 5.11pH计：测量精度±0.02。 5.12 2梨形瓶：200mL。 6试样的制备与保存 6.1试样的制备 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样 品瓶中，密封，并做上标记。 6.2试样保存 将试样于常温下保存。 7测定步骤 7.1提取 匀，加20mL乙酸乙酯，于振荡器上振荡20min，离心，取上清液至梨形瓶中。再用20mL乙酸乙酯提 7.2净化 将上述5mL水溶液移至OasisHLB柱中，以小于等于3mL/min的流速通过Oasis固相萃取柱 后，用5mL水洗涤梨形瓶，移至OasisHLB柱中洗柱，再用5mL甲醇十水（4.6）洗柱，弃去全部流出 液。在65kPa的负压下，减压抽干20min，将OasisHLB柱下接CarboxylicAcid固相萃取柱，用5mL 乙酸乙酯以小于等于3mL/min的流速洗脱OasisHLB柱并通过CarboxylicAcid固相萃取柱，弃去 OasisHLB柱，分别用5mL乙酸乙酯和5mL乙睛洗涤CarboxylicAcid固相萃取柱，弃去全部流出 液。在65kPa的负压下，减压抽干5min，用2mL洗脱剂（4.8）洗脱，收集洗脱液于5mL样品管中，用 2 GB/T18932.26—2005 洗脱剂定容至2mL，供液相色谱仪测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 a）色谱柱：DiamonsilCi8，5μm，250mmX4.6mm（内径）或相当者； b）流动相：乙腈+乙酸盐缓冲溶液（10+90)； c)流速:1.0 mL/min; d）柱温：25℃； e）进样量：50μL； f）检测波长：315nm。 7.3.2液相色谱测定 用甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑混合标准溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横 坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑 的响应值均应在仪器测定的线性范围内。甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑标准物质色谱图参见 图A.1。在上述色谱条件下，甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑的参考保留时间见表1。 表1甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑的参考保留时间 硝基咪唑类药物名称 保留时间/min 甲硝哒唑 12.7 洛硝哒唑 15.0 二甲硝咪唑 21.2 本方法的添加回收率数据参见附录B。 7.4平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.5空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。 8结果计算 结果按式(1)计算： V.1000 X=c: .(1) 式中： X—一试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）； V一样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。 注：计算结果应扣除空白值。 9精密度 本部分的精密度数据是按照GB/T6379的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来 计算。 9.1重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r），蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝 哒唑、二甲硝咪唑含量范围及重复性方程见表2。 3