ICS 11.020 C 06 中华人民共和国国家标准 GB/T 37272—2018 尿液中^9-四氢大麻酸的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of 11-nor-9-carboxy-delta-9-tetrahydrocannabinol in urine- Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 2019-04-01实施 2018-12-28发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 37272—2018 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国司法部提出并归口。 本标准起草单位：司法鉴定科学研究院。 本标准主要起草人：卓先义、向平、刘伟、严慧、沈保华、马栋、施妍、沈敏。 GB/T37272—2018 尿液中△°-四氢大麻酸的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了尿液中△°-四氢大麻酸的液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS)检测方法。 本标准适用于尿液中△-四氢大麻酸的定性分析和定量分析。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GA/T122毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 尿液中△-四氢大麻酸在碱性条件下水解，然后在酸性条件下用有机溶剂萃取，采用液相色谱-串联 质谱法进行检测。 5 试剂或材料 所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水；试剂和材料 包括： a) 正已烷。 乙酸乙酯。 c) 乙睛：HPLC级。 d) 甲酸：优级纯。 e) 乙酸铵：色谱纯。 f) 冰乙酸：优级纯。 g) 20mmol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵1.54g，置1000mL量瓶中，加水适量，加入甲酸2.0mL， 加水至刻度，摇匀。 h) 1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4.0g，加水100mL溶解。 1mol/L盐酸溶液：取浓盐酸20.8mL，加水稀释至250mL。 j) △°-四氢大麻酸对照品溶液：市售100ug/mL甲醇溶液，置冰箱中冷冻保存。保存时间为 12个月。 1 GB/T37272—2018 醇稀释得到。密封，置于冰箱中冷藏保存。保存时间为3个月。 1) 内标物△-四氢大麻酸-d，对照品溶液：市售100μg/mL甲醇溶液，置冰箱中冷冻保存。保存 时间为12个月。 m）内标物△-四氢大麻酸-d，对照品工作溶液：将内标对照品溶液用甲醇稀释，配制成10μg/mL 的工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。保存时间为3个月。 n) 具塞玻璃试管。 精密pH试纸。 6 仪器设备 仪器设备包括： 液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）。 b) 涡旋振荡器。 c) 离心机。 d) 恒温水浴锅。 e） 精密移液器：10μL~100μL、100μL~1000μL。 f) 电子天平。 7检测步骤 7.1 定性分析 7.1.1样品提取 DIS 精密量取待测样品尿液1mL，加入1mL的1mol/L氢氧化钠溶液调至pH13，80℃水浴中水解 30min，冷却后加人1mL的1mol/L盐酸溶液调至pH7~8，再加人100μL冰乙酸，调至pH4~5，加 200uL乙睛：20mmol/L乙酸铵溶液（9：1）定容，取5μL供LC-MS/MS检测。 7.1.2添加样品及空白样品 取空白尿液样品1mL两份，一份添加△-四氢大麻酸工作溶液制得15ng/mL添加样品，一份做 阴性对照，按上述操作与待测样品平行提取和分析。 7.1.3仪器检测 7.1.3.1 液相色谱-串联质谱仪参考条件 以下为参考条件，按照本法所获得的液相色谱-串联质谱图参见附录A中的图A.1，可根据不同品 牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱：MGIIC18.3μm，50mm×3mm（内径）或相当者； b)木 柱温：室温； 流动相：乙睛：20mmol/L乙酸胺和0.1%甲酸缓冲液（9：1）； (p 流速:200μL/min; e) 进样量：5μL; 2 GB/T 37272—2018 离子源：ESI，负离子模式； 离子喷雾电压：4000V； 离子源温度：450℃； i) 检测方式：多反应监测（MRM）； 碰撞气、气帘气等气流值应优化至最优灵敏度； k) °-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量见表1。 表1△°-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对、去簇电压（DP）、碰撞能量（CE) 名称 定性离子对 定量离子对 DP/V CE/eV 343/299 28 A°-四氢大麻酸 343/299 -80 343/245 -28 △"-四氢大麻酸-dg 352/308 352/308 80 30 7.1.3.2进样 分别吸取待测样品、空白和添加样品提取液，按7.1.3.1条件进样分析。 7.1.3.3记录和计算 记录各待测样品及添加样品平行进样后公°-四氢大麻酸的保留时间及峰面积值 在相同的试验条件下，待测样品中出现两对定性离子对色谱峰，其保留时间与添加样品中△°-四氢 大麻酸保留时间比较，相对误差在土2.5%内，且相对离子对丰度比与质量浓度相近添加样品中的相对 离子对丰度比之相对误差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在△-四氢大麻酸。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许相对误差 % 相对离子对丰度比 ≥50 20~50 10~20 01> 允许的相对误差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.2定量分析 7.2.1样品提取 取待测样品1mL两份，加入10μL内标工作溶液，余下同7.1.1。 另取空白样品两份，根据待测样品中△°-四氢大麻酸的质量浓度情况添加系列质量浓度的△-四氢 大麻酸，作为添加样品，与待测样品平行操作。 待测样品中△-四氢大麻酸的质量浓度应在工作曲线的线性范围内。 7.2.2仪器检测 仪器参考条件同7.1.3.1。 7.2.3进样 分别取待测样品、系列质量浓度的添加样品，按7.1.3.1条件进样分析。 7.2.4记录与计算 在系列浓度的△°-四氢大麻酸添加样品中，以△"-四氢大麻酸与内标物定量离子对的峰面积比（Y) 3