UDC 634.1/.8:635.1/.8:543 GB 中华人民共和国国家标准 GB 6195—86 水果、蔬菜维生素C含量测定法 2,6一二氯靛酚滴定法） Determination of vitamin C in yegetables and fruits (2,6- dichloro -indophenol ti tration method) 1986-01-18发布 1986-08-01实施 国家标准局批准 中华人民共和国国家标准 UDC 634.1/.8 水果、蔬菜维生素C含量测定法 :635.1/.8 543 GB 6195—86 （2.6一二氯靛酚滴定法） Determination of vitamin C in vegetables and fruits (2,6-dichloro-indophenol titration method) 适用范围 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、一价铜、 二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐），不适用于深色样品。 2 测定原理 染料2,6一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，-是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色， 还原态变为无色，二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。 用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色， 当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血 酸的含量。 3 仪器设备 高速组织捣碎机：8000~12000r/min。 b. 分析天平。 c. 滴定管：25ml、10ml。 d. 容量瓶：100ml。 锥形瓶：100ml、50ml。 e. 吸管：10ml、5ml、2ml、1ml。 f. g. 烧杯：250ml、50ml。 h. 漏斗。 试剂（凡末加说明者均为分析纯） 4 4.1 浸提剂 4.1.1 偏磷酸：2%溶液（W/V)*， 4.1.2 草酸： 2%溶液 (W/V)。 4.2抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸**，溶于浸提剂中并 稀至100ml。现配现用。 4.32.6-二氯靛酚（2,6-二氯靛酚吲哚酚钠盐）溶液：称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热蒸馏水 *偏磷酸不稳定，切勿加热。 **一般抗坏血酸纯度为99.5%以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用。若要检查其纯度，可按附录B方法 标定。 国家标准局1986-01-18发布 1986-08-01实施 1 GB 6195--86 中，然后称取2，6一二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250ml,过滤至棕色瓶内， 保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml 锥形瓶中，加入10ml浸提剂，摇匀，用2,6－二氯靛酚溶液滴定至溶液旱粉红色15s不褪色为止。同 时，另取10ml浸提剂做空白试验。 滴定度按式（1）计算： C.V 滴定度T（mg/ml） (1) V.-V? 式中：T- 一每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数； C 一抗坏血酸的浓度，mg/ml； -吸取抗坏血酸的体积，ml; V-一滴定抗坏血酸溶液所用2,6-二氯靛酚溶液的体积，ml; V2- 一滴定空白所用2,6一二氯靛酚溶液的体积，ml。 4.4白陶土（或称高岭上）：寸维生素C无吸附性。 5测定步骤 5.1样液制备：称取具有代表性样品的可食部分100g，放入组织捣碎机中，加100ml浸提剂，迅速 捣成匀浆。称10～40g浆状样品，用浸提剂将样品移人100ml容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤。若滤 液有色，可按每克样品加0.4g白陶土脱色后再过滤。 5.2滴定：吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中，用已标定过的2.6－二氯靛酚溶液滴定，直至溶液 呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。 6结果计算 6.1计算公式： 维生素C按式（2）计算： (V-Vo)*T.A 维生素C（mg/100g）二 K100 .(2 ) W 武中:V- 一滴定样液时消耗染料溶液的体积，ml； Vo- 一滴定空白时消耗染料溶液的体积，ml； T- 一26-二氯靛酚染料滴定度，mg/ml； A——稀释倍数; W样品重量，g。 6.2平行测定的结果，用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小数点后两位数字。 6.3平行测定结果的相对相差，在维生素C含量大于20mg/100g时，不得超过2%，小于20mg/100g 时，不得超过5%。 2 GB 6195-86 附录A 二甲苯一二氟靛酚比色法 (补充件） A.1适用范围 测定深色样品中还原型抗坏血酸。 A,2测定原理 用定量的2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应，多余的染料在酸性环境中 呈红色，用二甲苯萃取后比色，在一定范围内，吸光度与染料浓度呈线性相关，由剩余染料浓度用差 减法计算维生素C含量。 A.3仪器设备 A.3.1 3 分光光度计或比色计。 A.3.2具塞试管：50ml。 A.4试剂（皆为分析纯） A.4.1 偏磷酸：2%溶液（W/V）。 A.4.2 乙酸钠缓冲溶液（pH4.0）：500ml50%（W/V）的乙酸钠溶液与500ml冰乙酸混合。 A.4.32 2,6-二氯靛酚溶液：参照4.3条。 A.4.4 二甲苯。 A.5测定步骤 标准曲线的绘制：用6只50ml具塞试管加人5ml2%偏磷酸和5mlpH4.0的乙酸钠缓冲 A.5.1 液，然后依次加人0.0，0.1，0.3，0.6，0.9，1.2及1.5ml2,6－二氯靛酚溶液，用力摇动5s，再向 各试管中加入10ml二甲苯，再激烈摇动20s，静置分层后与试样管同时比色（无染料的试液作空白）， 以吸光度为纵坐标，2,6一二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标准曲线。 A.5.2吸取5ml2%偏磷酸样品浸出液（参照5.1条）于50ml具塞试管中，加5mlpH4.0的乙酸 钠缓冲液和2ml染料溶液，激烈摇动5s，立即加人10ml二甲苯，再激烈摇动20s，待静置分层后， 从二甲苯层中小心吸取一份，放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色。记录吸光度A，在标准 曲线上查出二甲苯层中2,6-二氯靛酚的毫升数。整个操作应在30min内完成。 A.6计算公式 _ × 100 W 式中：2一-所用2,6-二氯靛酚染料的体积，ml; V查得2,6-二氯靛酚溶液的体积，ml; A一 一稀释倍数； T. 染料滴定度，mg/ml； W——样品重量，g。 3 GB 6195-86 附录B 抗坏血酸纯度检验法 (补充件) B.1称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸待测样品，用2%偏磷酸或2%草酸溶液溶解稀释至 100 ml . B.2吸取抗坏血酸溶液1ml丁盛10ml2%偏磷酸或2%草酸溶液的锥形瓶中，加人6%碘化钾溶液 0.5ml和1%淀粉溶液五滴，摇匀。用1.67×10-4M碘酸钾标准溶液滴定，终点为极淡蓝色。 B.3计算公式 B.3.1抗坏血酸浓度按式（B1）计算： Vi×0.088 抗坏血酸浓度= .(B 1) V2 式中：Vl-—滴定时消耗1.67×10-4M碘酸钾标准溶液的体积，ml; V2——所取抗坏血酸溶液的体积，ml; 0.088—1ml1.67×10-4M碘酸钾溶液相当于抗坏血酸的重量，mg; B.3.2抗坏血酸纯度（%）按式（B2）计算： C.V 抗坏血酸纯度（%）= × 100 (B2) W 式中：C—所标定抗坏血酸的浓度，mg /ml; V——抗坏血酸溶液总体积，ml; W抗坏血酸重量，mg。 附加说明： 本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。 本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。