ICS 67. 040 C 53 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 22247—2008 保健食品中淫羊藿苷的测定 Determination of icariin in health foods 2008-11-01实施 2008-07-31发布 中华人民共和国卫生部 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22247—2008 前言 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准负责起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。 本标准参加起草单位：吉林省疾病预防控制中心 本标准主要起草人：杨大进、宋书锋、肖晶、马兰、李青。 本标准为首次发布。 GB/T22247—2008 保健食品中羊首的测定 1范围 本标准规定了保健食品中淫羊藿苷的测定方法 本标准适用于以淫羊藿为主要原料的保健食品中淫羊藿苷的测定。 本标准检出限：当取样量1.0g，定容至50mL，进样量10uL时，检出限为4×10-4g/100g，定量 限为1.2×10-g/100g。本标准的线性范围：2μg/mL~125μg/mL。 2原理 淫羊藿苷为淡黄色针状结晶，根据其易溶于水、乙醇、乙酸乙酯、不溶于醚、苯、三氯甲烷的理化特 性。试样中的淫羊藿苷用70%乙醇在超声波振荡下提取，定容，离心后取上清液过滤膜，经C1s反相柱 分离，在紫外检测器270nm波长处检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量 3试剂和材料 3.1甲醇(CHOH)：优级纯。 3.2无水乙醇（CzH,OH)：分析纯。 3.3石油醚（C，H2+2）：分析纯，沸程60℃90℃。 3.4水（H,O)：为实验室一级用水，电导率（25℃）为0.01mS/m。 3.5聚酰胺粉：60目~80目。 3.6淫羊藿苷对照品（C3H4.Oi5）：纯度≥98.0%。 甲醇溶解并定容至10mL，混匀（淫羊藿苷对照品储备液存放于2℃～10℃冰箱中，有效期90d）。 3.8淫羊藿苷对照品使用液（0.2mg/mL）：准确吸取1.0mL淫羊藿苷对照品储备液于10mL容量瓶 中，用甲醇定容至刻度，混匀（淫羊藿苷对照品使用液存放于2℃～10℃冰箱中，有效期90d）。 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器。 4.2超声波清洗器。 4.3离心机：4000r/min。 4.4层析柱：内径1.5cm，长15cm。 5分析步骤 5.1试样处理 5.1.1以单一淫羊藿为原料的试样：取研磨均匀的试样1.0g~4.0g（精确至0.001g），加人70%乙醇 30mL，超声提取20min，过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣，收集滤液，并定容至50mL，混匀，经 0.45μm微孔滤膜过滤后进样。 5.1.2含油试样：取混合均匀的试样1.0g~4.0g（精确至0.001g），置于离心管中，加人30mL石油 千后，按5.1.1向残渣中自“加入70%乙醇30mL起操作。 1 GB/T22247—2008 5.1.3淫羊藿为主要原料的试样：取研磨均匀的试样1.0g～4.0g（精确至0.001g），加人70%乙醇 30mL，超声提取20min，过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣，收集滤液，并定容至50mL，混匀，过滤。精 密吸取滤液25mL置于蒸发皿中，沸水浴上蒸干。蒸发皿中残渣用5mL水溶解，上聚酰胺柱（60目～ 80目，5g，内径1.5cm，干法上柱），以1mL/min的流速，用水50mL淋洗，弃去淋洗液，用乙醇100mL 洗脱，收集洗脱液，沸水浴蒸干。残渣用少量70%乙醇溶解并移至5mL容量瓶中，再用70%乙醇多次 洗涤并移入容量瓶，最后用70%乙醇定容至刻度，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤后进样。 5.1.4液体试样：取试样1mL~4mL，加入70%乙醇30mL，超声提取20min，过滤。用少量70%乙 醇洗涤残渣，收集滤液，并定容至50mL，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤后进样 5.2标准曲线的制备 将淫羊藿苷对照品使用液用甲醇稀释为2.0μg/mL、5.0ug/mL、25.0μg/mL、75.0μg/mL、 125.0μg/mL的标准溶液系列。 5.3液相色谱参考条件 5.3.1色谱柱：ODSCls柱，4.6mmX250mm，5μm。 5.3.2检测器：检测波长270nm。 5.3.3流动相：甲醇十水=65十35。 5.3.4进样量：10μL。 5.3.5流速：1.0mL/min。 5.3.6色谱分析：取标准溶液系列及试样溶液注人色谱中，以保留时间定性，以试样峰面积或峰高与标 准比较定量。 6结果计算 试样中淫羊藿苷的含量按式（1）进行计算： .(1) mX1000 式中： X一一试样中淫羊藿苷的含量，单位为克每千克或克每升（g/kg或g/L)； c—由标准曲线求得进样液中淫羊藿苷的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—试样定容体积，单位为毫升（mL）； F—试样的稀释倍数； m—试样的质量（或体积），单位为克或毫升（g或mL）。 计算结果保留三位有效数字。 7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。 8色谱图 在上述色谱条件下的色谱图见图1～图2。 2 GB/T22247—2008 吸0.12 光度 0. 10 80°0 0. 06 (1. 04 0. 02 0. 00 1. 00 2. 00 3. 00 4. 00 5.00 6. 00 7. 00 8. 00 9.00 10. 00 11. 00 12.00 t/min 图 1 淫羊藿苷标准色谱图 竖0.20 光度 0.15 羊在节 0.10 0.05 f/min 图 2 羊藿苷试样色谱图