ICS 67.120 X 04 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T21320—2007 动物源食品中阿维菌素类药物残留量 的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of avermectins residues in foodstuffs of animal origin- LC-MS/MS 2007-10-29发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T21320—2007 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中国农业大学、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：沈建忠、丁双阳、李晓薇、夏曦、张素霞、江海洋、程林丽、曹兴元、彭涛、国伟 GB/T21320—2007 动物源食品中阿维菌素类药物残留量 的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准适用于牛肝脏和牛肌肉中埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素残留量的测定。 本标准的方法检测限：埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素均为1.5μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一1992，neqISO3696：1987） 3原理 谱-串联质谱法测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水， 4.1乙腈：色谱纯。 4.2 三乙胺。 4.3甲酸：色谱纯。 4.4埃普利诺菌素标准品：纯度≥98%。 4.5阿维菌素标准品：纯度≥98%。 4.6 多拉菌素标准品：纯度≥94.3%。 4.7 伊维菌素标准品：纯度≥98%。 4.8 Cis固相萃取柱：500mg，3mL。 4.9Cg固相萃取柱：500mg，10ml。 4.10样品稀释液：水十三乙胺（30十0.045，体积比）。 4.11CIs固相萃取柱洗涤液：乙睛十水十三乙胺（40十60十0.1，体积比）。 4.12C8固相萃取柱洗涤液：乙十水十三乙胺（30十70十0.1体积比）。 4.13埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准储备液：100μg/mL。分别准确称取0.010g 埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品（4.4～4.7）于四个100mL容量瓶，用乙睛溶解 稀释至刻度。一20℃保存六个月。 4.14混合标准储备液：1μg/mL。取四种标准储备液（4.13）各1.0mL于100mL容量瓶中，用乙睛 稀释至刻度，4℃保存三个月。 4.15标准工作液：分别量取适量上述混合标准储备液（4.14），用乙稀释成浓度为1、5、10、20、50、 100和200ng/mL的系列标准工作液 1 GB/T213202007 5仪器 5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪：配有电喷雾电离源（electray sprayionozition，ESI)。 5.2离心机。 5.3振荡器。 5.4涡动仪。 5.5 氮吹仪。 5.6 组织匀浆机。 6试样制备与保存 取新鲜或解冻的动物组织，剪碎，10000r/min匀浆1min。一20℃下保存。 7分析步骤 7.1提取 称取试样2.5g（精确到0.01g），于50mL离心管中，加8mL乙腈，涡动0.5min，2000r/min离 心2min，取上清液。残渣用8mL乙睛重复提取一次，合并两次上清液。加30mL样品稀释液（4.10）， 涡动混合均匀，为样品提取液，备用 7.2净化 取C1：固相萃取柱，依次用5mL乙睛、5mLC18固相萃取柱洗涤液（4.11)活化。将备用的样品提 取液（7.1)过柱。用20mLC18固相萃取柱洗涤液（4.11）淋洗，抽干；再用3mL正已烷淋洗，抽干。 2mL乙睛洗脱，收集。加人4mL样品稀释液（4.10），混合均匀，备用。 取C固相萃取柱，依次用5mL乙腈和C固相萃取柱洗涤液（4.12）平衡，取备用液过柱。用 10mLCs固相萃取柱洗涤液（4.12）淋洗，挤干；再用8mL正已烷淋洗，挤干；用2mL乙晴洗脱，收集 洗脱液。于50℃下氮气吹干，加0.5mL乙睛溶解。过0.2μm滤膜，进样分析。 注：上样溶液、淋洗液和洗脱液的流速均控制不超过1mL/min。 7.3基质添加标准工作液的制备 取空白试样按提取（7.1)与净化（7.2）进行处理，在洗脱液中加人0.5mL相应浓度的标准工作液 （4.15），氮吹、定容后作为基质添加标准工作液，供液相色谱-串联质谱仪测定 7.4测定 7.4.1液相色谱条件 色谱柱：C8，150mmX2.1mm，粒径3μm，或相当者。 流动相：乙腈十水十甲酸（95十5十0.1，体积比）。 流速：0.2mL/min。 柱温：室温。 进样量：10μL。 7.4.2质谱参考条件 离子化方式：电喷雾离子源，正离子扫描（ESI十）。 毛细管电压：3.2kV。 离子源温度：120℃。 雾化气：300℃。 倍增器电压：650V。 碰撞气：氩气。 其他参数见表1。 2 GB/T 21320—2007 表 1 质谱参数设置 母离子 子离子 驻留时间/ 碰撞能量/ 锥孔电压/ 药物 (m/z) (m/z) ev V 352.0* 埃普利诺菌素 936.6 0.4 28 75 490.0 327.4 阿维菌素 895.6 0. 4 25 70 449.3 353.2 多拉菌素 921.5 0.4 28 80 449.0 329.18 伊维菌素 897.5 0.4 25 70 753.3 定量离子。 7.4.3液相色谱-串联质谱测定 根据样品溶液中药物的残留量，选择峰面积相近的标准工作液作为随行标样。对标准工作液和样 品溶液等体积参插进样进行测定。4种药物的离子色谱图见附录A。 7.4.3.1定性测定 通过液相色谱保留时间与串联质谱选择离子共同定性。待测样品的保留时间与外标标准样品保留 时间的相对偏差不大于2.5%。且与外标标准品相比，样品中待测组分两个定性子离子的相对丰度比 不大于10%。 7.4.3.2定量测定 分别取适量试样溶液和相应浓度的基质添加标准工作液，作单点校准，以色谱峰面积积分值定量。 标准工作液及试样液中阿维菌素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内，试样液进样测定过 程中应参插标准工作液，以便准确定量。标准溶液离子色谱图见附录A。 8结果计算与表达 按式(1)计算试样中阿维菌素类药物的残留量。 (1) A,Xm 式中： X一一试样中药物的残留量，单位为微克每千克（μg/kg）； A试样特征离子峰面积； V-试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL)； C—基质标准溶液浓度，单位为微克每升（ug/L）； A.- 一基质标准溶液特征离子峰面积； 试样质量，单位为克（g）。 m 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。 3