ICS 67.120 x 04 中华人民共和国国家标准 GB/T21310—2007 动物源性食品中甲状腺抗剂残留量 检测方法 高效液相色谱/串联质谱法 Determination of residues of thyreostats in foodstuffs of animal origin- HPLC-MS/MS method 2008-04-01实施 2007-10-29发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T21310—2007 前言 本标准的附录A、附录B、附录C均为资料性附录 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：彭涛、于静、国伟、李晓娟、孙利、凌云、代汉慧、张鸿伟、储晓刚、唐英章。 GB/T21310—2007 动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量 检测方法高效液相色谱/串联质谱法 1范围 本标准规定了动物源性食品中硫脲嘧啶（2-thiouracil，TU）、甲琉咪唑（methimazole，TAP）、甲基 硫氧嘧啶（methylthiouracil，MTU）、丙硫氧嘧啶（propylthiouracil，PTU）、苯基硫氧嘧啶（phenylthi- ouracil，PhTU）、2-巯基苯并咪唑（2-mercaptobenzimidazole，MBI)残留量高效液相色谱/串联质谱测定 方法。 本标准适用于动物源性食品肌肉（兔肉、鸡肉、牛肉、猪肉）、内脏（兔肝、鸡肝）、奶和蛋中硫脲嘧啶、 甲巯咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶、2-巯基苯并咪唑残留量的定性确证和定量测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) 3方法提要 采用乙酸乙酯提取试样中残留的硫脲嘧啶、甲巯咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和 2-统基苯并咪唑，提取液经液液分配和HLB固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱/串联质谱定性检 测，内标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：高效液相色谱级。 4.2甲酸：高效液相色谱级。 4.3 乙酸乙酯：高效液相色谱级。 4.4正已烷：高效液相色谱级。 4.5乙睛：高效液相色谱级。 4.6 磷酸。 4.7 巯基乙醇。 4.8 二水乙二胺四乙酸二钠。 4.9无水硫酸钠：650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。 4.100.1mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液：准确称取37.2g二水乙二胺四乙酸二钠（4.8），用水溶解并 定容至1L。 4.11乙腈饱和的正已烷：量取正已烷80mL于100mL分液漏斗中，加人适量乙睛后，剧烈振摇，待分 配平衡后，弃去乙腈层。 4.120.1%甲酸水溶液：准确量取1mL甲酸（4.2),用水定容至1L。 4.130.0025mol/L磷酸：准确量取0.2mL磷酸，用水定容至1L。 1 GB/T213102007 4.14溶解液：90mL0.1%甲酸水溶液（4.12)中加入10mL甲醇 4.15标准物质：硫脲嘧啶、甲疏咪唑、甲基硫氧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶、2-巯基苯并咪唑，纯 度均≥99%。 4.16内标物质：5，6-二甲基硫氧嘧啶（5，6-dimethyl-2-thiouracil，DMTU），纯度≥99%。 4.17标准储备溶液：准确称取适量标准品（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/ml 的标准储备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个月。 4.18混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（4.17）各1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻 度，配制成浓度为10ug/mL的混合中间标准溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月， 4.19混合标准工作溶液：根据需要用甲醇把混合中间标准溶液（4.18）稀释成适合浓度的混合标准工 作溶液，现用现配。 4.20内标标准储备液：准确称取适量5,6-二甲基硫氧嘧啶（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配制成浓 度为100μg/mL的内标标准储备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个月。 4.21内标标准工作溶液：准确移取0.1mL内标标准储备液（4.20）于10mL容量瓶中，用甲醇定容至 刻度，配制成浓度为1ug/mL的内标标准工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月。 4.22 2HLB固相萃取柱：200mg6mL，或相当者。 4.23 微孔滤膜：0.20um，有机相。 4.24 氮气：纯度≥99.999%。 4.25金 氩气：纯度≥99.999%。 5仪器和设备 5.1 液相色谱/串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。 5. 2 组织捣碎机。 5.3 分析天平：感量0.0001g，0.01g。 5.4均质器：10000r/min。 5.5 振荡器。 5.6 离心机：10000r/min。 5.7 氮吹仪。 5. 8 旋涡混合器。 5. 9 超声波水浴。 5210 5.10 减压浓缩仪。 5.11 梨形瓶：100mL。 5.12具塞塑料离心管：50mL。 5.13 3刻度试管：10mL。 5.14 移液枪：5mL，lmL，200μL。 5.15分液漏斗：50mL。 6试样制备 6.1肌肉和内脏 从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装人洁净容 器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻避光保存。 6.2奶 从原始样品取出有代表性样品约500g，充分搅拌混匀，均分成两份，分别装人洁净容器作为试样， 密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。 2 GB/T21310—2007 6.3蛋 从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混勾，均分成两份，分别装入 洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。 注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化。 7样品处理 7.1提取 称取约5g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，依次加人150μL内标标准工作液 （4.21）、50uL硫基乙醇（4.7）、30uL0.1moL/L的乙二胺四乙酸二钠溶液（4.10）和适量无水硫酸钠 （4.9），吸去样品中的水分，再加人20mL乙酸乙酯，用均质器以10000r/min均质1min后，振荡提取 20min，再以4000r/min离心5min，收集上清液于100mL梨形瓶中。残渣用20ml乙酸乙酯再提取 一次，合并上清液，在40℃水浴中减压浓缩至近干。残留物用10mL乙睛溶解，并转移至50mL分液 漏斗中，用30mL乙饱和后的正已烷（4.11)分三次液液分配，去除油脂。收集乙睛层，在40℃水浴中 减压浓缩至近干，残留物用10mL0.0025mol/L磷酸（4.13)溶解，超声波水浴助溶5min后，待净化。 7.2净化 HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水预淋洗后，转人10mL样品提取液（7.1）。先用5mL 程控制流速不超过2mL/min。洗脱液在40℃下用N²吹干。残留物用1mL溶解液（4.14）溶解，涡动 1min后，过0.2μm微孔滤膜，供仪器检测。 7.3混合基质标准溶液的制备 称取5份约5g阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，按照标准曲线最终定容浓度分 余下操作同7.1和7.2。 8测定 8.1液相色谱条件 色谱柱：WatersACQUITYUPLCTMBEHCis50mmX2.1mm(内径），1.7μum，或相当者； a) 柱温：30℃； b) c) 流速：0.2mL/min； d) 进样量：5uL； e) 流动相及洗脱条件见表1。 表1# 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流动相A（甲醇） 流动相B(4.12) 0 10% %06 1. 00 10% 90% 4.00 %06 10% 6. 00 %06 10% 7.00 10% %06 10.00 10% %06 8.2串联质谱条件 参见附录A。 3