ICS 67.180. 10 B 47 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 21169—2007 蜂蜜中双甲胖及其代谢物残留量测定 液相色谱法 Determination of amitraz and metabolite residues in honey- Liquid chromatography 2007-10-31发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21169—2007 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 本标准主要起草人：赵增运、陈惠兰、林宏、吴斌、丁涛、徐锦忠、沈崇钰、朱成晶、蒋原、陶宏锦。 GB/T21169—2007 蜂蜜中双甲胖及其代谢物残留量测定 液相色谱法 1范围 本标准规定了蜂蜜中双甲及其代谢物残留量液相色谱测定方法提要、测定步骤、结果计算。 本标准适用于蜂蜜中双甲胖及其代谢物残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3方法提要 蜂蜜样品中双甲胖及其代谢物用正已烷、异丙醇混合提取液提取，提取液浓缩后，依次用乙、水定 容，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水， 4.2 2乙睛：HPLC级。 4.3 正已烷：优级纯。 4.4异丙醇：分析纯。 4.5 混合提取液：将60mL的正已烷与30mL的异丙醇混合 4.6 氢氧化钠：分析纯。 4.7 氢氧化钠溶液：0.1mol/L。称取4.0g氢氧化钠，溶于1000mL水中。 4.8 乙酸铵溶液：0.02mol/L。称取1.54g乙酸铵，溶于1000mL水中。 4. 9 双甲胖标准品（纯度>99%）。 4.10 2，4-二甲基苯胺标准品（纯度>99%）。 4.11双甲胖标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的双甲胖标准物质（4.9），用乙睛配成 0.1mg/mL的标准储备液。储备液保存于4℃冰箱中，根据需要再用乙睛稀释成适当浓度的标准工作 液。保存3个月。 4.122,4-二甲基苯胺标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的2.4-二甲基苯胺标准物质（4.10）， 用乙睛配成0.1mg/mL的标准储备液。储备液保存于4℃冰箱中，根据需要再用乙睛稀释成适当浓度 的标准工作液。保存3个月。 5仪器 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 5.2分析天平：感量0.1mg。 5.3天平：感量0.01g。 1 GB/T211692007 5.4方 旋转蒸发器或相当者。 5.5 旋涡混匀器。 5.6移液管:10mL,5mL，lmL。 5.7有机滤膜：0.45μm。 5.8离心机:3000r/min，10000r/min 5.9具塞离心管：50mL，1.5mL。 6试样的制备与保存 6.1试样制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。均分成两份，分别装入样品瓶内作为原始样品。密 封并标明标记。 6.2试样保存 将试样于常温状态下保存。 注：在取样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7测定步骤 7.1提取 称取5g试样（精确至0.01g）。置于50mL具塞离心管中，加人5.0mL氢氧化钠溶液，旋涡混匀 1min，再加入15.0mL混合提取液，旋涡混勾1min，混匀后于3000r/min下离心5min，吸取上层液 转移至50mL离心管中；再加人10.0mL正已烷，旋涡混勾1min，混匀后于3000r/min下离心5min， 残渣，转移至1.5mL离心管；再加人0.50ml水溶解残渣，合并转移至1.5mL离心管，在 10000r/min离心5min，溶液过0.45μm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱仪测定。 7.2测定 7.2.1液相色谱条件 a) 色谱柱：C18，5μm，150mm×4.6mm（内径），或相当者； b) 流动相：乙腈（A）十0.02mol/L乙酸铵水溶液（B)； 8%06%89%9 c) 90%A,16.0 min~16.1min 90%~35%A,16.1min~20.0 min 35%A; d) 流速：1.0mL/min; e) 柱温：30℃； f) 进样量：20μL； g） 检测波长:235nm(0min~10.0min);289nm(10.0min~20.0min); h) 检测器：紫外检测器。 7. 2. 2 液相色谱测定 根据样液中双甲残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中双甲 及其代谢物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定。在 上述色谱条件下，双甲的保留时间约为13.44min，其代谢物的保留时间约为7.24min。标准品色谱 图参见图A.1。 7.3空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 2 GB/T 21169—2007 8结果计算 8.1结果用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中双甲残留量，计算结果需扣除空白值。 A. cr.V X, : (1) Astmi 式中： X——试样中双甲残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg)； 样液中双甲的峰面积； 标准工作溶液中双甲胱的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）； C1 Vi- 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； Asr 标准工作溶液中双甲的峰面积； mi 最终样液代表的试样量，单位为克（g）。 8.2结果用色谱数据处理机或按式（2)计算试样中代谢物换算成双甲滕残留量，计算结果需扣除空 白值。 X2 = (2 ) As·m2 式中： X2 试样中代谢物换算成双甲滕残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A2 样液中双甲代谢物（2，4-二甲基苯胺）的峰面积； 标准工作溶液中双甲代谢物（2，4-二甲基苯胺）的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； C2 V2- 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； As2 标准工作溶液中双甲代谢物（2，4-二甲基苯胺）的峰面积； 最终样液代表的试样量，单位为克（g)； m2 1.21 由2，4-二甲基苯胺分子质量换算为双甲胖分子质量的转换系数。 8.3双甲胖残留总量按式（3)计算。 X+X=X (3) 式中： X.——试样中双甲残留总含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Xi 试样中双甲残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； X一试样中代谢物换算成双甲胖残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）。 9检测低限、回收率 9.1检测低限 本方法的检测低限双甲胖为0.01mg/kg，双甲胖代谢物（2,4-二甲基苯胺）为0.02mg/kg。 9.2回收率 蜂蜜中双甲胖在添加水平0.010mg/kg~0.100mg/kg范围内，其回收率为99.8%~100.0%；双 甲胖代谢物（2，4-二甲基苯胺）在添加水平0.020mg/kg~0.100mg/kg范围内，其回收率为71.7%~ 73.6%。