ICS 67.120.99 B 45 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T 21165—2007 肠衣中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of chloramphenicol residues in casing- LC-MS/MS method 2007-10-31发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21165—2007 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 本标准主要起草人：徐锦忠、吴斌、李丽花、沈崇钰、赵增运、丁涛、陈惠兰、张扬、蒋原、蔡宝亮 陶宏锦。 GB/T21165—2007 肠衣中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了肠衣中氯霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于肠衣中氯霉素残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) 3方法提要 试样加人内标后用乙酸乙酯提取，蒸干提取溶液，利用液相色谱-串联质谱仪测定，梯度洗脱去除基 质干扰，内标法定量。 4试剂和材料 4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水， 4.2甲醇：HPLC级 4.3乙酸乙酯：分析纯。 4.4氛代氯霉素内标：纯度≥99%。 4.5氯霉素标准物质：纯度≥99%。 4.6氯霉素标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的氯霉素标准物质（4.5），用甲醇配成 0.1mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4℃冰箱中，可使用2个月。 成0.1mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4C冰箱中。 4.8氛代氯霉素内标工作溶液：取适量内标储备液稀释成50.0ng/mL工作溶液，内标工作溶液在4℃ 保存。 4.9氯霉素标准工作溶液：用空白样品提取液分别配成氯霉素浓度为0.2ng/mL、0.5ng/mL、 1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL标准工作溶液，标准工作溶液中内标物浓度均为 5.0ng/mL。标准工作溶液在4℃保存，可使用一周。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。 5.3旋转蒸发器。 5.4旋涡混匀器。 5.5离心机。 1 GB/T21165—2007 5.6移液器：10mL和200μL。 5.7离心管：50mL，具塞。 5.8浓缩瓶：50mL。 6试样的制备与保存 6.1试样制备 将实验室样品绞碎均匀，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记 6.2试样保存 将试样于一18℃下保存。 7测定步骤 7.1样品处理 称取5g试样，精确到0.01g。置于50mL具塞离心管中，加入0.100mL50.0ng/mL的内标物 （4.8），加人10mL乙酸乙酯，于旋涡混匀器上快速混合2min，以2000r/min离心5min，收集上层清 液于干净浓缩瓶中，再次加入6mL乙酸乙酯，于旋涡混匀器上快速混合2min，以2000r/min离心 5min，合并上清液，于40℃水浴中旋转蒸发至干，用甲醇十水（30十70）定容至1.0mL，溶液过0.45μm 滤膜到进样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。 7.2测定 7.2.1液相色谱条件 色谱柱：ODSCls，5μm，150mmX2.1mm（内径），或相当者； 流动相:甲醇（A)+水（B),0min~3.0min30%~90%A，3.0min~6.0min90%A, 6.0 min~6.1 min 30% A, 6.1 min~8.0 min 30% A; c) 流速：0.2mL/min; d) 柱温：30℃； e) 进样量：25μL。 7. 2. 2 串联质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子监测； b) 扫描方式：选择离子检测（SRM）： ) 雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氮气； 电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值； e) 定性离子对、定量离子对和碰撞气能量见表1。 表1定性离子对、定量离子对和碰撞气能量 定性离子对（m/z) 定量离子对（m/z） 碰撞气能量/eV 321/176 17 321/152 321/152 -19 321/194 16 326/157（内标） 326/157（内标） -19 7.3液相色谱-质谱测定 值为纵坐标，工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定 量，样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，氯霉素参考保留时 间为3.60min士0.2min。氯霉素标准物质色谱图和质谱图参见图A.1。 2 GB/T21165—2007 7. 4 空白试验 除不加人试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值： R.·m. =* R..m 式中： 样品中氯霉素的浓度，单位为微克每千克（μg/kg）； Rx——样品中氯霉素的峰面积与相应内标峰面积比值； 氯霉素标准品的质量，单位为纳克（ng）； m R。标准品中氯霉素的峰面积与相应内标峰面积比值； 样品质量，单位为克（g）。 m 9 检测低限和回收率 9.1检测低限 本方法对肠衣中氯霉素残留量的检测低限为0.1μg/kg。 9. 2 回收率 肠衣中氯霉素添加浓度及平均回收率（内标校正）的试验数据： 在0.1μg/kg时，回收率范围为74.0%~130.0%； 在0.3μg/kg时，回收率范围为91.8%~136.0%； 在1.0μg/kg时，回收率范围为93.7%~134.1%。