ICS 67.180. 10 X 31 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 18932.24—2005 蜂蜜中呋喃它酮、喃西林、喃妥因和 喃唑酮代谢物残留量的测定方法 液相色谱-串联质谱法 Method for the determination of the metabolite residues of furaltadon nitrofurazone, nitrofurantoin and furazolidone in honey- 2005-08-01实施 2005-02-04发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T18932.24—2005 前言 GB/118932本部分的附录A、附录B为资料性附录。 本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本部分由中华全国供销合作总社归口。 本部分起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：庞国芳、张进杰、曹彦忠、郭彤彤、范春林、李学民、刘永明、曹亚平。 本部分系首次发布的国家标准。 GB/T18932.24—2005 蜂蜜中呋喃它酮、喃西林、呋喃妥因和 呋喃唑酮代谢物残留量的测定方法 液相色谱-串联质谱法 1范围 GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮、喃西林 的代谢物氨基脲、呋哺妥因的代谢物1-氨基-2-内酰脲和哺唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮残留量液 相色谱-串联质谱的测定方法。 残留量的测定。 1-氨基-2-内酰脲为0.5μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性（GB/T 63791986.neqISO5725:1981) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 试样中残留的硝基呋喃类抗生素代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或相 当的固相萃取柱净化。电喷雾离子化，液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。 4试剂和材料 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3 乙酸乙酯：色谱纯。 4.4 磷酸氢二钾：优级纯。 4.5乙酸：优级纯。 4. 6 二甲亚砜：优级纯。 4.7 盐酸：优级纯。 4.8氢氧化钠：优级纯。 4.92-硝基苯甲醛（2-NP）：含量≥99%。 4. 10 磷酸氢二钾溶液：0.1mol/L。称取17.4g磷酸氢二钾（4.4），用水溶解，定容至1000mL。 4.11盐酸:0.2mol/L。量取17mL浓盐酸（4.7)用水定容至1000mL。 1 GB/T18932.24—2005 4.12氢氧化钠溶液：1mol/L。称取40g氢氧化钠（4.8），用水溶解，定容至1000mL。 4.13衍生剂：含2-硝基苯甲醛0.05mol/L。称取0.075g2-硝基苯甲醛（4.9）溶于10mL二甲亚砜 （4.6），现用现配。 4.14样品定容溶液：乙腈（4.2）十0.4%乙酸（4.5）水溶液（1十9）。 4.15OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg，3mL。使用前分别用5mL甲醇（4.1)和10mL水预 处理，保持柱体湿润。 4.160.45μm滤膜。 4.175-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮、氨基脲、1-氨基-2-内酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮标准物质：纯度 ≥99%。 4.185-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮、氨基脲、1-氨基-2-内酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮标准储备溶液： 1.0mg/mL。称取适量的四种硝基呋代谢物标准物质（4.17），分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准储 备液。储备液避光贮存在一18℃冰柜中，保存期为三个月。 4.195-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮、氨基脲、1-氨基-2-内酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮混合标准工作溶 液：1.0μg/mL。吸取适量四种硝基呋喃代谢物的标准储备溶液（4.18），用甲醇配成1.0μg/mL的混 合标准工作溶液，标准工作溶液避光贮存在一18C冰柜中，保存期为三个月，使用前回温到室温。 适量四种硝基呋喃代谢物的混合标准工作溶液（4.19），按照样品操作步骤同步操作。使最终样液中 5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮和3-氨基-2-唑烷基酮的浓度均分别为0ng/mL，0.5ng/mL 1.0ng/mL,2.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL,20.0ng/mL；氨基脲、1-氨基-2-内酰脲的浓度均分别 为0ng/mL，l.0ng/mL2.0ng/mL,5.0ng/mL,10.0ng/mL，20.0ng/mL,50.0ng/mL作为基质标 准校准溶液，该基质标准校准溶液即配即用 5仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。 5.3 液体混匀器。 5.4 固相萃取装置。 5.5 氮气吹干仪。 5.6 恒温箱。 5.7 真空泵：真空度应达到80kPa。 5.81 微量注射器：25μL，100μL。 5.9 棕色具塞离心管：25mL，50mL。 5.10pH计：测量精度土0.02。 5.11贮液器：50mL。 6试样的制备与保存 6.1试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样 品瓶中，密封，并做上标记 6.2试样保存 将试样于常温下保存。 2 GB/T18932.24—2005 7测定步骤 7.1水解和衍生化 称取4g试样（精确到0.01g）于50mL棕色离心管中（5.9)，加人5mL0.2mol/L盐酸溶液 （4.11）和0.15mL衍生剂（4.13），涡旋混合1min，置于37℃恒温箱（5.6）中保持16h 7.2净化 将上述衍生溶液（7.1）取出放置至室温，加人3mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（4.10），用1mol/L 氢氧化钠溶液（4.12）调节溶液pH约7.4，倒入下接OasisHLB固相萃取柱（4.15)的贮液器（5.11)中， 在固相萃取装置（5.4)上使样液以小于2mL/min的流速通过OasisHLB柱，待样液全部通过固相萃取 柱后用6mL水洗固相萃取柱，弃去全部流出液。用真空泵（5.7）在65kPa负压下抽干OasisHLB固 相萃取柱10min。再用4mL乙酸乙酯（4.3）洗脱被测物，洗脱液全部收集于25mL棕色离心管中，并 在氮气吹干仪（5.5）上40℃水浴吹干，1mL样品定容液（4.14）定容。定容液混匀后过0.45um滤膜 （4.16），滤液供液相色谱-串联质谱测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 a) 色谱柱：ZORBAXSB-C18，3.5μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者； b) 柱温：30℃； c) 进样量：40μL； d) 流动相及流速见表1。 表1济 液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 流速/（μL/min） 0.4%乙酸水溶液/（%） 乙腈/(%） 0.00 200 70 30 3.00 200 70 30 200 3. 01 20 80 8.00 20 80 200 8.01 200 70 30 15.00 200 70 30 7.3.2 质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源（ESI)； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d) 电喷雾电压（IS)：5500V； e) 雾化气（NEB)压力：0.076MPa； f) 气帘气（CUR）压力：0.069MPa； g) 碰撞气（CAD）压力：0.030MPa； h) 辅助气（AUX）流速：7L/min； i) 辅助气温度（TEM）：500℃C； j) 聚焦电压（FP）：200V； k) 碰撞室出口电压（CXP）：11V； 1) Q1,Q3均为单位分辨率（UNIT)； m) 定性离子对、定量离子对、采集时间（DWell)、去簇电压（DP）及碰撞能量（CE)见表2。