ICS 67.060 X 04 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 23818—2009 大豆中咪唑琳酮类除草剂残留量的测定 Determination of imidazolinone herbicide residues in soybean 2009-05-25发布 2009-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T23818—2009 前言 本标准的附录A、附录B均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国江西出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：李晓娟、祁彦、张新忠、占春瑞、陈冬东、代汉慧、彭涛、贾然、李建忠、杨强 李淑娟、储晓刚。 GB/T23818—2009 大豆中咪唑啉酮类除草剂残留量的测定 1范围 效液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于大豆籽粒中咪唑烟酸、甲基咪草烟、咪草酸甲酯、咪唑乙烟酸、咪唑喹啉酸残留量的 测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,MOD） 3原理 试样用二氯甲烷提取，凝胶渗透色谱法和液液分配法净化，高效液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱 法测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水 4.1乙睛：色谱纯。 4.2正已烷：色谱纯 4.3 二氯甲烷。 4.4磷酸。 4.5滤膜：0.22μm，有机相。 4.6标准物质 4.6.1咪唑烟酸（imazapyr，CASNo.81334-34-1）：纯度大于等于99%。 4.6.2甲基咪草烟（imazapic，CASNo.104098-48-8）：纯度大于等于99%。 4.6.3咪草酸甲酯（imazamethabenz-methyl,CASNo.81405-85-8）：纯度大于等于99.5%。 4.6.4咪唑乙烟酸（imazethapyr，CASNo.81335-77-5）：纯度大于等于99%。 4.6.5咪唑喹琳酸（imazaquin，CASNo.81335-37-7）：纯度大于等于99.5%。 4.7标准储备溶液：分别准确称取各标准物质10mg（精确至0.1mg），用乙睛溶解并定容至100mL， 配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液，各标准储备溶液于0℃4℃避光保存。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 5.2液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾电离源。 5.3粉碎机。 5.4样品筛：筛孔尺寸0.425mm。 5.5分析天平：感量为0.1mg和1mg。 1 GB/T23818—2009 5.6涡旋混合器。 5.7振荡器。 5.8旋转蒸发仪。 5.9离心机。 5.10具塞离心管。 5.11凝胶渗透色谱仪：填料BiobeadsS-X3，40g；玻璃柱700mmX25mm；流动相二氯甲烷；流动相 流速5.0mL/min；进样量5.0mL；检测波长250nm。 6试样制备与保存 6.1试样制备 取代表性试样500g，用粉碎机粉碎并使其全部通过0.425mm的样品筛，混和均匀，装人洁净的容 器内，密封并标识。 6.2试样保存 试样于0℃～4℃避光保存。取样、制样及保存过程中应防止试样受到污染或者残留农药含量发 生变化。 7分析步骤 7.1提取 旋混合2min后置于振荡器上振荡提取20min，以4000r/min速度离心5min，取上层清液并经二氯甲 烷润湿的滤纸过滤后，收集于100mL梨形瓶中。再向残余试样中加人35mL二氯甲烷，重复上述操 作。再用10mL二氯甲烷分3次～5次洗涤离心管和滤纸，合并洗涤液于梨形瓶中，于40℃水浴中减 压浓缩至约3mL。将浓缩液用二氯甲烷定容至10mL，以4000r/min速度离心5min，再将上层清液 转移至 GPC进样瓶中,待净化 7.2净化 样品提取液首先采用凝胶渗透色谱法净化，在5.11的仪器条件下，收集第13.80min~22.8min 的馏分共45mL，于40℃水浴中减压浓缩至近干，再用氮气吹干。用2mL乙溶解残渣，再加人2mL 乙睛饱和的正已烷，涡旋振荡2min，静置分层后弃去正已烷层，乙腈层用氮气吹干。再用乙腈定容至 1.0mL,供HPLC和LC-MS/MS测定。 7.3高效液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定 7.3.1高效液相色谱法参考条件 a) 色谱柱：Cl8柱，250mmX4.6mm（内径），5μm，或相当者； b) 柱温：30C； c) 流动相及梯度洗脱程序参见附录A； d) 流速：1.0mL/min; e) 进样量：10μL； f) 检测波长：250nm。 7. 3. 2 液相色谱-质谱/质谱法参考条件 a) 色谱柱：Cis柱，150mm×2.1mm（内径），3.5μm，或相当者； 柱温：30℃； c) 流动相及梯度洗脱程序参见附录A； d) 流速：0.2mL/min; e) 进样量：10μL； 2 GB/T23818—2009 f）质谱/质谱参考条件参见附录A。 7.3.3定量测定 中咪唑啉酮类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液及样液等体积交替进样测 13.73min，咪唑乙烟酸15.98min，咪唑喹啉酸20.38min，色谱图参见附录B中图B.1。 7.3.3.2LC-MS/MS法：根据样液中咪唑啉酮类除草剂的含量，选取浓度相近的标准工作溶液，待测 样液中咪唑琳酮类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液及样液等体积交替进 样测定。在7.3.2的仪器条件下，保留时间约为咪唑烟酸5.21min，甲基咪草烟6.63min，咪草酸甲酯 7.03min，咪唑乙烟酸7.29min，咪唑喹啉酸7.78min，多反应监测质量色谱图参见附录B中图B.2。 7.3.4定性测定 按照上述条件测定试样和标准溶液，如果试样中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶液相比在 丰度偏差不超过表1的规定，则可判断试样中存在相应的目标化合物。 表1定性离子相对丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 允许的最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 7.4空白试验 除不称取试样外，均按上述条件和步骤进行。 8结果计算与表达 试样中待测化合物的残留量可采用数据处理软件或按式（1）计算： (1) mX1000 式中： X一试样中待测化合物的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C一一从标准曲线中得到的待测化合物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V—样液最终定容体积，单位为毫升（mL)； m一—最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。 9测定低限和回收率 9.1测定低限 本标准液相色谱法对各待测物的测定低限为0.05mg/kg；液相色谱-质谱/质谱法对各待测物的测 定低限为0.02mg/kg。 9.2回收率 本标准高效液相色谱法在添加浓度0.05mg/kg~1.00mg/kg范围内，回收率在88.2%~105.9% 之间； 本标准液相色谱-质谱/质谱法在添加浓度0.02mg/kg~1.00mg/kg范围内，回收率在81.8%~ 103.9%之间。 3