ICS65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2727—2015 蔬菜烟粉虱抗药性监测技术规程 Guideline for insecticide resistance monitoring of Bemisia tabaci(Gennadius)on vegetables 行业标准信息服务平台 2015-05-21发布 2015-08-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 2727—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、中国农业科学院蔬菜花卉研究所、天津市植保植 检站。 本标准主要起草人：张帅、张友军、邵振润、王少丽、杨爱宾、谢文。 行业标准信息服务平台 NY/T2727—2015 蔬菜烟粉虱抗药性蓝测技术规程 1范围 本标准规定了琼脂保湿浸叶法对烟粉虱[Bemisiatabaci（Gennadius）]成虫、浸茎系统测定法和叶 片浸渍法对烟粉虱若虫和卵抗药性的监测方法。 本标准适用于烟粉虱成虫、若虫和卵对常用杀虫剂的抗药性监测。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 琼脂保湿浸叶法leafdippingmethod 将浸过药液的叶碟放在玻璃管底部平铺的固体琼脂上，昆虫通过接触和取食带毒叶片而进行生物 测定的方法。 2. 2 浸茎系统测定法stemdippingmethod 将带有供试昆虫的植物茎部插人装有药液的玻璃瓶中饲养，昆虫通过取食进入植物体内并传导扩 散的药剂而进行生物测定的方法。 2. 3 叶片浸渍法leaf-pestdippingmethod 将带有供试昆虫的植物叶片浸渍在药液中，昆虫通过接触药液和取食叶片而进行生物测定的方法。 3试剂与材料 3.1生物试材 试虫：烟粉虱成虫、若虫和卵。 供试植物：甘蓝苗和棉花苗。成虫采用甘蓝叶片，若虫和卵采用棉花苗。 标准信 3.2试验药剂 杀虫剂原药。 3.3试验试剂 服务平台 TritonX-100(或吐温-80)；丙酮(对不易溶解的药剂.可添加其他助溶剂)；所用试剂为分析纯，水 为蒸馏水。 4仪器设备 电子天平（感量0.1mg）； 打孔器（直径2.2cm）； 平底玻璃管（长7.8cm，直径2.2cm）； 微波炉； 移液器（5mL)； 容量瓶（10mL、50mL、100mL、500mL）； 量筒（500mL）； 1 NY/T 2727—2015 烧杯(10ml、25mL100mL,500ml); 塑料培养皿（直径5cm）； 吸虫器； 棕色玻璃瓶（10mL）； 显微镜； 人工气候箱：温度（25土1）℃、相对湿度60%～80%、光照周期16h：8h（L：D）。 5试验步骤 5.1试材准备 5.1.1无虫苗培育 5.1.1.1甘蓝苗的培育 将甘蓝籽播种到装好土的托盘里，盖上塑料布，无虫温室内培育，4d～5d后出苗，待甘蓝苗生长 20d～30d后，即4片～5片真叶后进行分苗，在营养钵内单独培育，供测试用。 5.1.1.2棉花苗的培育 将催芽后的棉籽播种到装好土的苗盆里，无虫温室内培育，待棉苗长出第1片真叶，叶片直径2cm 时，从根部切断棉苗，使棉茎长度为10cm，插入水中培养待用。 5.1.2试虫准备 置于玻璃试管内，或采集带有伪蛹的植物叶片200片以上，带回室内饲养，鉴定烟粉虱的生物型。 接虫产卵：将棉苗放于改造过的培养皿中。培养Ⅲ改造方法如下：培养皿盖中央开一个直径3cm 的圆孔，用直径约4cm的60目～100日纱网将培养皿的孔封上。在培养血底盖侧边对应位置各开一个 直径约为1cm的半圆，内侧贴上海绵封口，在半圆的中间位置将海绵切开一条缝隙，一侧用于放置棉 茎，另一侧用于接虫。每皿接入15对雌雄成虫产卵，24h后移去成虫，显微镜下记录每个叶片背面卵的 数目，至少20粒。 5.2药剂配制 5.2.1琼脂玻璃管的制作 用三角瓶配制15g/L～17g/L的琼脂，用微波炉充分溶解。取出后晾5min～10min，至瓶口无热 气涌出。用微量移液器吸取2mI液体琼脂，加人到平底玻璃管底部，冷却凝固后待用。 5.2.2药剂溶解和配制 准确称取一定量的原药，用有机溶剂溶解，加人终浓度0.1%TritonX-100（或0.1%吐温-80)定 容，配制成母液。用移液管吸取母液，用Triton水溶液按照等比梯度配制成5个～7个系列浓度。每个 浓度药液量不少于250ml。 5.3处理方法 5.3.1叶碟制作及浸药 用打孔器将新鲜、平展的甘蓝叶片打成直径2.2cm叶碟，避开叶脉部位。将叶碟浸于待测药液中， 10s后取出晾干，叶背向上平铺于琼脂玻璃管中。按浓度从低到高的顺序重复上述操作，每处理不少于 4次重复，并设不含药剂的Triton水溶液作空白对照。 5.3.2接虫与计数 5.3.2.1烟粉虱成虫 琼脂保湿浸叶法：将铺好叶碟的玻璃管，管口朝下倾斜放在有烟粉虱成虫的寄主植物上，轻拍植株 或用吸虫器等使烟粉虱进人管内，每管20头～25头，将棉塞塞至距离管底1.5cm处。接虫30min后， 记录每管内的活虫数（即总虫数）。 2 NY/T 2727-2015 5.3.2.2烟粉虱卵 将带卵棉苗置于显微镜下检查记录每叶卵数，进行药剂处理。内吸性杀虫剂采用浸茎系统测定法， 非内吸性杀虫剂采用叶片浸渍法。 浸茎系统测定法：将带卵棉苗的棉茎插入装有10mL药液的棕色玻璃瓶中，并设空白对照。 叶片浸渍法：将带卵棉苗的叶片浸药液中，20s后取出晾干，将棉茎插人装有清水的棕色玻璃瓶 中，并设空白对照。 5.3.2.3烟粉虱若虫 将带有发育至2龄若虫的棉叶置于显微镜下，检查记录若虫基数，采用浸茎系统测定法或叶片浸渍 法进行测定。 5.4结果检查 处理后放置于温度为（26土1)℃、相对湿度60%～80%、光照周期16h：8h（L：D)条件下饲养和 观察，处理成虫的玻璃管管口朝下放置。 5.4.1烟粉虱成虫 处理后48h，检查记录死亡情况，记录总虫数和死虫数。试虫不能正常活动视为死亡。 5.4.2烟粉虱卵 处理8d以后，检查记录死亡情况，卵不能孵化视为死亡。 5.4.3烟粉虱若虫 处理12d以后，检查记录死亡情况，若虫不能正常发育为伪视为死亡。 6数据统计与分析 6.1死亡率计算方法 根据检查数据，计算各处理的校正死亡率。按式(1)和式(2)计算，计算结果均保留两位有效数字。 P= (1) 式中： P—一死亡率，单位为百分率（%)； K——表示死亡虫数，单位为头； N—表示处理总虫数，单位为头。 Pt-Po X 100 (2) 100 -P 信息服务平 式中： P1一一校正死亡率,单位为百分率(%)； P,一一处理死亡率,单位为百分率(%)； P。一空白对照死亡率，单位为百分率（%）。 对照死亡率在10%以下。 6.2回归方程和致死中浓度（LCso）计算方法 采用PoloPlus等统计软件进行概率值分析，求出每个药剂的LC5o值及其95%置信限、斜率（b值） 及其标准误。 7抗药性水平的计算与评估 7.1烟粉虱对部分杀虫剂的敏感性基线 参见附录A。 3 NY/T2727—2015 7.2抗性倍数的计算 根据敏感品系的LCso值和测试种群的LCso值，按式（3)计算测试种群的抗性倍数。 RR : （3） 式中： RR- 一测试种群的抗性倍数； T 一测试种群的LC5o值； s 一敏感品系的LCso值。 7.3抗药性水平的评估 根据抗性倍数的计算结果，按照表1中抗药性水平的分级标准，结合烟粉虱所属生物型，对测试种 群的抗药性水平做出评估。 表1抗药性水平的分级标准 抗药性水平分级 抗性倍数，倍 低水平抗性 5.0<RR≤10.0 中等水平抗性 10.0<RR≤100.0 高水平抗性 RR>100.0 行业标准信息服务平台 NY/T27272015 附录A （资料性附录） 烟粉虱对部分杀虫剂的敏感性基线 A. 1 B型烟粉虱成虫对部分杀虫剂的敏感性基线 见表A.1。 表A.1 B型烟粉虱成虫对部分杀虫剂的敏感性基线 LCso 药剂名称 斜率土标准误 mg/L(95%置信限） 阿维菌素 1.85±0.20 0.087(0.063~0.120) 烯啶虫胺 1.15±0.12 2.22(1.57~3.12) 噻虫嗪 1.06±0.11 17.80(9.78~32.50) 啶虫 3.47±0.36 3.22(2.44~4.24) 吡虫啉 1.12±0.08 8. 72(6. 40~11. 9) 溴氰虫酰胺 1.58±0.11 6.23(4.89~7.94) 丁硫克百威 1.12±0.10 441(332~586) 毒死蜱 2.73±0.23 174(142~213) 氯氰菊酯 1.27±0.05 137(110~171) 联苯菊酯 1.54±0.13 118(88~159) 注1:B型烟粉虱种群于2000年8月采自北京市郊甘蓝田，在室内不接触任何药剂的情况下用京丰1号甘蓝苗在室内 饲养至今所建立的相对敏感品系。 注2：烟粉虱成虫对氯氰菊酯敏感性基线数据引自袁林泽等（应用昆虫学报，2011)的结果。 A. 2 B型和Q型烟粉虱卵对部分杀虫剂的敏感性基线 见表 A. 2。 表 A. 2 B型和Q型烟粉虱卵对部分杀虫剂的敏感性基线 LCso 药剂名称 生物型 斜率土标准误 mg/L(95%置信限） B 0.95±0.06 0.00064(0.00052~0.00078) 溴氰虫酰胺 Q 0.85±0.06 0. 13(0. 09~0. 18) B 2. 43±0.12 0. 003 4(0. 002 9~ 0