T/CRHA017—2023 2023-08-01实施ICS11.100 CCSC04 团体标准 T/CRHA017—2023 ———————————————————————————————— ———————— 人肝祖细胞类器官构建、质量控制与保藏 操作指南 Guidelinesfortheestablishment，qualitycontrolandstorage ofHumanhepaticprogenitorcellderivedorganoids 2023-07-14发布 中国研究型医院学会发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CRHA017—2023 I目次 前言...................................................................................................................................................II 引言.................................................................................................................................................III 1范围...............................................................................................................................................1 2规范性引用文件...........................................................................................................................1 3术语和定义...................................................................................................................................1 4缩略语...........................................................................................................................................3 5基本原则.......................................................................................................................................3 6操作流程与方法...........................................................................................................................4 7检测指标与检测方法...................................................................................................................7 附录A（资料性）肝脏类器官培养用主要试剂材料与操作要点.................................................9 附录B（资料性）短串联重复序列（STR）检测.........................................................................11 附录C（资料性）染色体核型检测...............................................................................................12 附录D（资料性）肝脏类器官鉴定...............................................................................................13 附录E（资料性）标志基因检测实时荧光定量PCR法.............................................................17 参考文献...........................................................................................................................................19 全国团体标准信息平台 T/CRHA017—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规 则起草。 本文件由中国研究型医院学会肝胆胰外科专业委员会提出。 本文件由中国研究型医院学会归口。 本文件起草单位：清华大学附属北京清华长庚医院、中国食品药品检定研究院、中国计量科学研究 院、中国医学科学院药物研究所、中国科学院上海药物研究所、上海美迪西生物医药股份有限公司。 本文件主要起草人：王韫芳、李迪、刁金美、陈昱安、王璇、耿兴超、王晶、傅博强、强桂芬、潘 国宇、彭双清、李桦。 全国团体标准信息平台 T/CRHA017—2023 III引言 类器官（organoids）是具有器官关键性特征的三维（3D）细胞培养物，它包括一个自 我更新干细胞群，可分化为多个器官特异性的细胞类型，与相对应的器官拥有类似的空间组 织并能够重现对应器官的部分功能，从而提供一个高度生理相关系统。类器官与传统模型相 比，具备细胞增殖分化、自我更新、自组装、可长期培养、遗传稳定性等特点，因此可以模 拟体内器官发育和生理过程，是一种可用来开发模拟人类疾病的更好模型，和高效、低成本、 精准的药筛平台。 作为近10年来生物学界和临床医学最热门的前沿技术之一，类器官技术取得突飞猛进 的发展，人体各个器官均有其类器官建立的报道，同样肝脏类器官的建立及应用也是研究的 热点。肝脏类器官培养起始细胞来源较多，包括多能干细胞、原代分离的肝（祖）细胞等， 而人肝脏组织的来源可能涉及的风险和伦理敏感性，运送的冷链保持，类器官建立所涉及的 原代细胞分离、培养、扩增、冻存、复苏、质量控制、功能分析检测等具体试验操作的标准 规范，以及整个过程中的污染控制，都体现了肝脏类器官建立及检测方案的多样性、复杂性 和特殊性。 鉴于此，制定实验室人肝祖细胞类器官的构建、保藏及检测应遵循的技术通用要求，有 助于规范人肝脏类器官的研究、开发与评价，从而推动肝脏类器官在基础医学和临床研究(包 括肝脏发育学的研究、疾病模型的建立、药物的筛选、基因治疗和器官芯片的研发等)应用 中的发展。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CRHA017—2023 1人肝祖细胞类器官构建、质量控制与保藏操作指南 1范围 本文件提供了人肝祖细胞类器官构建、质量控制和保藏的基本原则、操作流程方法以及检测指标与 检测方法的指导与建议。 本文件适用于人肝祖细胞类器官的培养、传代、储存、复苏和质量控制。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T37864—2019生物样本库质量和能力通用要求（ISO20387:2018） GB/T38736—2020人类生物样本保藏伦理要求 GB/T42060—2022医学实验室样品采集、运送、接收和处理指南（ISO/TS20658:2017） WS233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 类器官organoids 类器官是干细胞、前体细胞和/或分化细胞通过细胞-细胞间以及细胞-基质间的互作而自发组织形成 的体外三维结构，能在多个方面再现体内相应组织或器官的结构与功能。 3.2 肝祖细胞liverprogenitorcells 一种卵圆形、高核质比的细胞，位于肝实质细胞与汇管区交界的Hering’s管，从形态和体积上类似 于胆管上皮细胞，被认为具有肝细胞、胆管细胞双向分化潜能。 3.3 3D细胞培养three-dimensionalcellculture 将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养,使细胞能够在载体的三 维立体空间结构中迁移、生长,构成三维的细胞-载体复合物。 全国团体标准信息平台 T/CRHA017—2023 23.4 肝脏类器官培养基culturemediumofliverorganoids 用于提供体外模拟肝祖细胞生长及分化所需微环境，能诱导肝脏祖细胞长期体外扩增培养，并向成 熟肝细胞分化，维持肝祖细胞及肝脏细胞特性，实现体外肝脏活组织类器官长期存活的培养