ICS 13.060 C 51 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4163—2020 水质 藻类计数 视野计数法 Water quality—Algae count—Field count method 2020 - 09 - 25 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 10 - 25 实施 发 布 DB37/T 4163—2020 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 原理 .............................................................................. 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 1 6 样品 .............................................................................. 2 7 分析步骤 .......................................................................... 3 8 结果计算与报告 .................................................................... 4 9 精密度 ............................................................................ 5 10 质量保证和质量控制 ............................................................... 5 附录 A（资料性附录） 常见藻类图谱 .................................................... 6 参考文献 ............................................................................ 20 I DB37/T 4163—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省住房和城乡建设厅提出并组织实施。 本标准由山东省城镇给水排水标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省城市供排水水质监测中心、国家城市供水水质监测网福州监测站、东营市 自来水公司水质检测中心、国家城市供水水质监测网武汉监测站、潍坊市公用事业产品服务质量监测中 心、山东省济南生态环境监测中心。 本标准主要起草人：贾瑞宝、孙韶华、王明泉、赵清华、石近淼、刘轲、逯南南、朱光进、李令春、 张昊天、田立平、郑琳琳、王辉、王晓波、钱君丽、吴锦铃。 II DB37/T 4163—2020 水质 藻类计数 视野计数法 1 范围 本标准规定了测定水中藻类计数的视野计数法。 本标准适用于生活饮用水及其水源水中藻类计数的测定。 取样1 L，浓缩至50 mL时，本方法检测限为0.1 万个/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5750.2—2006 生活饮用水标准检验方法 水样的采集与保存 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 《水和废水监测分析方法》（第四版 增补版） 中国环境科学出版社 3 原理 藻类漂浮在水体中，难以进行活体显微观察、计数。利用鲁哥氏液固定藻类，并使藻类的鞭毛、纤 毛、细胞核及细胞内淀粉染色，通过计数藻类细胞或个体数目，反映水体中藻类的分布情况。 4 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为纯水。 4.1 纯水：符合 GB/T 6682 二级及以上分析实验室用水要求。 4.2 碘：分析纯。 4.3 碘化钾：分析纯。 4.4 甲醛：分析纯，含量 37 %～40 %。 4.5 鲁哥氏液：碘（4.2）50 g；碘化钾（4.3）100 g；纯水（4.1）1 000 mL。称取 100.0 g 碘化钾， 溶于 800 mL 蒸馏水中，待完全溶解后充分摇动，再加入 50.0 g 碘。待碘完全溶解后定容至 1 000 mL， 储存于磨口棕色试剂瓶内。 4.6 40 %甲醛溶液：甲醛（4.4）40 mL；纯水（4.1）60 mL。量取 40 mL 甲醛，倒入 100 mL 烧杯中，再 量取 60 mL 纯水，倒入烧杯中搅拌均匀，储存于磨口棕色试剂瓶内。 5 仪器和设备 5.1 显微镜：具 10 倍目镜，具 20 倍、40 倍、100 倍物镜，测微尺。 5.2 竖式采水器：不锈钢 2 L。 5.3 样品瓶：棕色玻璃瓶，4 L。 1 DB37/T 4163—2020 5.4 筒形分液漏斗：1 000 mL。 5.5 虹吸管：管内直径 3 mm～5 mm，一端使用孔径 64 μm 筛绢扎紧。 5.6 锥形离心管：塑料，具盖 50 mL。 5.7 量筒：50 mL 和 100 mL。 5.8 滴管：1 mL。 5.9 浮游生物计数框：体积 100 μL，面积 20 mm×20 mm，横竖划分为 10×10 行，共 100 个计数小格， 每个计数小格面积为 2 mm×2 mm。 5.10 浮游生物计数器。 5.11 烧杯：500 mL。 5.12 容量瓶：1 L。 6 样品 6.1 样品的采集 6.1.1 采样点位的设置 采样点的设置要有代表性，采集的藻类能够代表一个水体或者一个水体不同区域的实际状况。根据 水体和周围环境的自然生态类型、人类干扰的空间特性，布设有代表性的采样点位（断面），与长期定 位观测及水化学监测点位（断面）尽可能保持一致，同时考虑采样点位（断面）布设的经济性。 6.1.2 采样频次 采样频率一般全年至少四次（每季度一次），条件允许时，每个月一次。当出现水华风险时，要随 时增加采样次数。考虑到浮游藻类的日变化，监测时间尽量选择在一天的相近时间，比如上午的8～10 时，如果无法做到，则需记录下每次实际的监测时间。 6.1.3 采样要求 生活饮用水的采集，参照GB/T 5750.2—2006，取样时应打开龙头放水数分钟，排出沉积物，采集 水样。 地表水的采集，需根据采样点位的水深设置采样层次。水深＜2 m时，不分层，在表层下0.5 m采集； 水深为2 m～5 m时，分别在表层下0.5 m、底层上0.5 m各采集一次；水深＞5 m时，则在表层下0.5 m处、 中层以及底层上0.5 m处各采集一次。不同层次采集的样品作等比例混合样处理。 地下水的采集，对于自喷的泉水，可在涌口处直接采集；对于不自喷的泉水，应将停滞在抽水管中 的水汲出，新水更替后再进行采集；从井水采集水样，应在充分抽汲后进行，以保证水样的代表性。 采样量根据浮游藻类的密度而定。一般原则使用竖式采水器（5.2）采集不少于2 L水样。 6.1.4 样品标识和记录 在样品瓶外侧标注样品编号，在现场采样记录表上记录采样日期、天气状况、水体名称、采样地点、 采样方法等信息。 6.2 样品的固定和保存 按照《水和废水监测分析方法》（第四版 增补版），取混匀水样1 L倒入筒形分液漏斗（5.4）， 加入10 mL鲁哥氏液（4.5）混匀，静置24 h。 未固定的水样在4 ℃～10 ℃条件下避光保存不得超过4 h。 2 DB37/T 4163—2020 7 分析步骤 7.1 浓缩 将虹吸管（5.5）带有筛绢的一端放入水样中，将上层清液缓慢吸出（不可搅动溶液底部，如被搅 动则需重新静置沉淀24 h），虹吸管使用时随液面缓慢向下移动并接近上液面，最后将剩余30 mL～40 mL 样品转入50 mL量筒（5.7）中。为减少藻类损失，用少许纯水冲洗筒形分液漏斗1～2次并转入50 mL量筒 中，最终定容至50 mL，移入锥形离心管（5.6），室温下避光保存，待检。浓缩液在14 d内镜检计数。 如需长期保存（＞14 d），补加1 mL～2 mL 40 %甲醛溶液（4.6）。 7.2 制片 7.2.1 新购买的浮游生物计数框（5.9）应对其体积进行校准：吸取 100 μL 纯水注入计数框内，制片 后应达到无气泡、无溢出的要求。 7.2.2 将浓缩液缓慢多次摇匀后，将盖玻片斜盖在计数框上，用滴管（5.8）吸取 0.1 mL 浓缩液移入 计数框，在计数框中一边进样，另一边出气，避免气泡产生。注满后把盖玻片移正，盖上盖玻片，盖玻 片下不能存有气泡。将计数框放置于潮湿、暗室内静置 15 min～30 min，使具有气囊类藻类沉降至计数 框底层，便于计数。 7.3 镜检 7.3.1 预观察 在10倍目镜、20倍物镜下定性观察，在10倍目镜、40倍物镜下计数，每个视野以十几个藻体为宜。 若计数框中藻类分布不均匀或杂质粘附无法分辨清楚，再次混匀浓缩液重新制片；若视野中藻类过多难 以计数时，将浓缩液用纯水（4.1）稀释后重新制片。 7.3.2 分类鉴定 按照藻类形态，对照标准图谱进行分类。藻类形态学鉴定到属。常见藻类图谱见附录A。 7.3.3 计数面积选择 计数时，对计数框中的第2、5、8行共30个计数小格进行计数，视野数可按浮游藻类多少而酌情增 减，以优势种类超过300个细胞为宜。若每个视野中只有1～2个藻体，则全片计数。计数面积选择见图1。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2 3 4 5 6 7 8 9 10 图1 计数面积选择 3 DB37/T 4163—2020 7.3.4 计数 7.3.4.1 当藻体一半以上处于计数视野内则计数；当藻体的一半在计数视野内而另一半在计数视野外， 计