ICS 65.150 B 50 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4093—2020 用于核酸提取的鱼类样本野外采集、处理及 保存技术规范 Technical specification for collection, processing and storage of fish samples for nucleic acid extraction in nature environment 2020 - 08 - 20 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 09 - 20 实施 发 布 DB37/T 4093—2020 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 缩略语 ............................................................................. 1 5 样本采集前准备 ..................................................................... 2 5.1 采集方案设计 ................................................................... 2 5.2 稀有或珍惜物种的采集 ........................................................... 2 5.3 采集工具和材料 ................................................................. 2 6 鱼类获取 ........................................................................... 2 6.1 获取方法 ....................................................................... 2 6.2 鱼类信息记录 ................................................................... 2 6.3 拍照规范 ....................................................................... 2 7 样本采集及处理 ..................................................................... 3 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 消毒 ........................................................................... 鱼的预处理 ..................................................................... 取样 ........................................................................... 样本处理 ....................................................................... 取样量 ......................................................................... 3 3 3 4 4 8 编码规则 ........................................................................... 5 8.1 鱼类凭证编号 ................................................................... 5 8.2 组织样本编号 ................................................................... 5 9 样本运输 ........................................................................... 5 9.1 运输要求 ....................................................................... 5 9.2 样本包装 ....................................................................... 5 9.3 干冰需求量 ..................................................................... 6 10 样本储存 .......................................................................... 6 11 质量控制 .......................................................................... 6 附录 A（规范性附录） 野外鱼类采集信息表 ............................................... 7 附录 B（规范性附录） 拍照例图 ......................................................... 8 附录 C（规范性附录） 鱼体各器官对应的英文缩写 ......................................... 9 参考文献 ............................................................................ 10 I DB37/T 4093—2020 前 言 本标准按GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省海洋局提出并组织实施。 本标准由山东省海洋标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：青岛华大基因研究院。 本标准主要起草人：张梦淇、刘姗姗、王萌萌、苏小珊、孟亮。 II DB37/T 4093—2020 用于核酸提取的鱼类样本野外采集、处理及保存技术规范 1 范围 本标准规定了用于核酸提取的鱼类样本野外采集、处理及保存的技术规范及其相关要求。 本标准适用于在野外获取分子生物学、基因组学相关研究的鱼类样本。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 HJ 628 生物遗传资源采集技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 野外 nature environment 泛指市场、码头、养殖场、海水以及淡水水域等非实验室环境。 3.2 用于核酸提取的鱼类样本 fish sample for nucleic acid 在鱼体上采集到的、可进行高质量核酸提取并应用于分子生物学、基因组学相关研究的组织和器官。 3.3 伤害性取样 destructive sampling 将鱼体进行有效麻醉或低温休克，通过解剖来获得新鲜鱼类组织、器官等样本的取样方法。 3.4 轻微伤害性取样 non-destructive sampling 将鱼体进行有效麻醉或低温休克，通过采集血液、鳍条等组织，保证鱼体存活并对其生理机能和生 命不产生重大影响的取样方法。 3.5 尾静脉 tail vein 尾静脉是指紧贴于鱼体尾椎骨下方的静脉血管。 4 缩略语 1 DB37/T 4093—2020 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid） RNA：核糖核酸（Ribonucleic Acid） MS-222：间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（3-Aminobenzoic acid ethyl ester methanesulfonate） 5 样本采集前准备 5.1 采集方案设计 采集鱼类之前应制定完整的采集方案，了解野外采集区域鱼类的分布，根据当地自然情况制定采集 路线，避免无目的的采集活动破坏鱼类的自然栖息地。 5.2 稀有或珍惜物种的采集 若需采集的鱼类属于稀有或珍惜物种，应当按照相关法律法规的要求，向相关主管部门提出申请， 获得批准后方可实施采集。 5.3 采集工具和材料 5.3.1 样本处理器材 医用剪刀、解剖刀、镊子、解剖盘、乳胶手套、医用口罩、毛巾、酒精棉球、冻存管、冻存管盒、 封口袋、封口膜、注射器、巴氏吸管、液氮罐。器材应进行洗净并消毒，确保无核酸酶污染。 5.3.2 处理和保存试剂 0.65 %生理盐水（淡水鱼用）、1.2 %生理盐水（海水鱼用）、75 %乙醇、无水乙醇、抗凝剂、MS-222、 无RNA酶水、RNA保存液。 5.3.3 记录工具 抗冻标签纸、拍照背景板、比色卡、标尺（量程20 cm、分度值0.1 cm）、蓄电电子秤、高清相机、 记号笔、铅笔等。 5.3.4 运输耗材 泡沫箱、棉花、冰袋、干冰。 6 鱼类获取 6.1 获取方法 在市场、码头、养殖场、自然水域等地，通过购买、垂钓、捕捞等方法获取。 6.2 鱼类信息记录 现场获取到新鲜活体鱼类后，填写《野外鱼类采集信息表》，详见附录A。 6.3 拍照规范 2 DB37/T 4093—2020 选取干净的白色平板作为背景板，同批鱼类尽量保证用同一背景板。同时，准备比色卡（消除因光 照、拍摄原因造成的误差