ICS 65.202 B 61 福 DB35 建 省 地 方 标 准 DB35/T 1927—2020 猕猴桃无病毒苗木繁育技术规程 Technical code of practice for propagation of virus-free kiwifruit nursery stock 2020 - 09 - 29 发布 福建省市场监督管理局 2020 - 12 - 29 实施 发 布 DB35/T 1927—2020 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 病毒的检测 ........................................................................ 1 5 无病毒母株的获取 .................................................................. 1 6 无病毒母本园的建立与管理 .......................................................... 2 7 无病毒苗木的繁育 .................................................................. 3 8 无病毒苗木的质量要求及分级标准 .................................................... 4 9 无病毒苗木的标识与包装 ............................................................ 4 附录 A（资料性附录） 猕猴桃病毒 PCR 检测法 ............................................ 5 I DB35/T 1927—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由福建省农业科学院提出。 本标准由福建省农业农村厅归口。 本标准起草单位：福建省农业科学院果树研究所、柘荣县迦百农种植专业合作社。 本标准主要起草人：陈义挺、冯新、赖瑞联、高敏霞、陈文光、陈婷、吴如健、林凤岚。 II DB35/T 1927—2020 猕猴桃无病毒苗木繁育技术规程 1 范围 本标准规定了猕猴桃无病毒苗木的病毒的检测、无病毒母株的获取、无病毒母本园的建立与管 理、无病毒苗木的繁育、无病毒苗木的质量要求及分级标准、无病毒苗木的标识与包装。 本标准适用于福建省栽培的猕猴桃品种的无病毒苗木的繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 2828.10 计数抽样检验程序 第10部分：GB/T 2828计数抽样检验系列标准导则 GB 19174—2010 猕猴桃苗木 DB35/T 935—2009 建宁猕猴桃 育苗技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 无病毒母株 virus-free mother plant 通过病毒脱除处理或直接筛选获得的、经检测并确认不携带本文件规定的病毒的植株。 3.2 无病毒苗木 virus-free seedling 未携带有本文件规定的病毒的猕猴桃苗木。 3.3 无病毒母本园 virus-free mother block 用于提供猕猴桃无病毒母株保存的圃地。 4 病毒的检测 4.1 病毒的种类 本标准规定的猕猴桃病毒包括：猕猴桃病毒A（Actinidia virus A，AcVA）、猕猴桃病毒B（Actinidia virus B，AcVB）、猕猴桃病毒X（Actinidia virus X，AVX）、黄瓜坏死病毒（Cucummber necrosis virus， CNV）、苜蓿花叶病毒（Alfalfa mosaic virus，AMV）、樱桃卷叶病毒（Cherry Leaf Roll virus，CLRV）、 长叶车前草花叶病毒（Ribgrass Mosaic virus，RMS）、天竺葵带状斑点病毒（Pelargonium zonate spot virus，PZSV）和柑橘叶斑驳病毒（Citrus leaf blotch virus，CLBV）。 1 DB35/T 1927—2020 4.2 病毒的检测 参见附录A。 5 无病毒母株的获取 5.1 脱毒材料的选择 选择品种纯正、经观察未发现病毒病症状且生长健壮、性状优良的植株，参照4.2的方法进行病毒 检测，确定不携带4.1规定的病毒的可作为无病毒母株；经检测，确定植株已感染4.1规定的病毒，则应 进行脱毒处理，病毒脱除后培育的猕猴桃植株，经检测为无病毒的，也可作为无病毒母株。 5.2 病毒的脱除 5.2.1 热处理脱毒法 在春秋季节且气温为20 ℃～25 ℃时，将2～3年生猕猴桃营养钵苗移入温室，调节温度至30 ℃预 培养3 d；之后每天增加1 ℃，达到45 ℃时，开始计时进行热处理；热处理20 d后，每株切取新抽发嫩 梢顶端0.8 cm～1.5 cm的部位10个，采用舌接法嫁接到无病毒猕猴桃砧木上。温室湿度保持在60%～80%。 成活后全部参照4.2的方法进行病毒检测，确认病毒脱除后可作为无病毒母株材料保存。 5.2.2 茎尖培养脱毒法 5.2.2.1 外植体获取和消毒 从生长健壮、无病虫害的猕猴桃树上剪取新梢顶端2 cm～3 cm长的部位作为外植体，用70%酒精消 毒35 s后，用0.1%氯化汞溶液浸泡灭菌4 min，无菌水冲洗4～5次。 5.2.2.2 外植体接种与初代培养 无菌环境中，在解剖镜下，剥除外植体的幼叶和外部叶原基，留下约（0.1±0.05） cm的茎尖分 生组织，接种于分化培养基（MS+1.5 mg/L ZT+0.5 mg/L IBA，pH5.8，附加7.0 g/L琼脂和3.0%蔗糖）， 在温度（25±1） ℃、光照2 000 Lx、光周期为12 h光/12 h暗的条件下进行初代培养，40 d后分化 出新芽。 5.2.2.3 增殖培养和病毒检测 将新芽接种于增殖培养基（MS+2.0 mg/L BA+0.5 mg/L IBA，pH5.8，附加7.0 g/L琼脂和3.0%蔗糖）， 培养条件与初代培养相同，每35 d转接继代1次，共需要9次。获得的所有猕猴桃试管苗应进行病毒的初 次检测，剔除带病毒植株。 5.2.2.4 生根培养 以不带病毒的增殖苗为材料，切取1.5 cm～2 cm长的嫩梢转接到生根培养基（1/2 MS+0.7 mg/L IBA， pH5.8，附加7.0 g/L琼脂和3.0%蔗糖），在（25±1） ℃条件下培养20 d进行生根和壮苗。 5.2.2.5 炼苗和移栽 炼苗：选择生长健壮、苗高3 cm、根数3条以上的组培苗，松开瓶盖置于60%～80%遮光率的荫棚内， 期间控制荫棚内温度（25±1） ℃，采用喷雾洒水保持湿度70%～90%，放置3 d～5 d。随后，打开瓶 盖，采用喷雾洒水保持湿度60%～80%，光照增强至3 000 Lx～4 000 Lx，继续炼苗3 d～5 d。 2 DB35/T 1927—2020 移栽：将组培苗根部培养基洗去，移栽至含有园土和泥炭土（体积比1:1）混合基质的营养钵（口 径×高为16 cm×16 cm），浇透水，置于覆盖60目防虫网的温网室内，在营养钵上覆盖塑料薄膜，期间 及时喷水以保持茎叶湿润，15 d后揭去薄膜。 6 无病毒母本园的建立与管理 6.1 地点 圃地所在区域应为非猕猴桃溃疡病发生区与猕猴桃适栽区。选择疏松肥沃、排水良好、微酸性的砂 质壤土，且5年内未栽植过果树的地块。全圃采用60目防虫网覆盖，圃地只设一个出入口且配置缓冲区， 与其他果园或苗圃距离大于2 km。 6.2 无病毒母株的种植 经检测确定不携带4.1规定的猕猴桃病毒，或经5.2猕猴桃病毒脱除的植株可作为无病毒母株栽种， 株行距为3 m×4 m。 6.3 无病毒母本园的管理 每月定期观察圃内猕猴桃无病毒母株是否有病毒病症状，每年春梢萌发后10 d进行病毒检测，经检 测，淘汰不符合3.2定义的植株。 7 无病毒苗木的繁育 7.1 组培苗培育 7.1.1 外植体获取、消毒和初代培养 参照5.2.2.1和5.2.2.2的方法。 7.1.2 增殖培养 将新芽接种于增殖培养基（MS+2.0 mg/L BA+0.5 mg/L IBA，pH5.8，附加7.0 g/L琼脂和3.0%蔗糖）， 培养条件与初代培养相同，每35 d转接继代1次。 7.1.3 生根和壮苗培养 参照 5.2.2.4 的方法。 7.1.4 炼苗和移栽 参照 5.2.2.5 的方法。 7.1.5 苗圃培育 选择疏松肥沃、排灌水方便、光照良好、冬春季无霜冻的地块作为苗圃地；冬春季有霜冻的区域，在 温室大棚建立苗圃。将成活的无病毒苗木连同营养钵放到苗圃中培养。苗木的管理参照DB35/T 935—2009 的要求执行。 3 DB35/T 1927—2020 7.2 嫁接苗培育 7.2.1 砧木准备 选择生长健康、无病虫害的，参照4.2的方法检测后不携带病毒、茎粗达0.6 cm以上的猕猴桃砧木 苗，嫁接前砧木苗摘心，并去除基部萌蘖。 7.2.2 嫁接 7.2.2.1 接穗选择 取生长健壮、芽体饱满、无病害的当年生木质化的猕猴桃无病毒母株枝条，挂牌标记母株编号。冬 季剪下的接穗，应立即放在阴凉处，用2%湿沙埋藏备用。 7.2.2.2 嫁接时间与方法 冬季落叶后到伤流期前10 d，采用切接法把接穗嫁接到猕猴桃无病毒砧木上，用1.0 cm～1.5 cm 宽的塑料薄膜缠绕，只露出接芽。嫁接位置距地面10 cm～15 cm，按品种及母株编号分别嫁接并记载， 并做好嫁接苗的防冻措施。 7.2.2.3 嫁