ICS 07.080 B 30 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 30988—2014 多酚类植物基因组DNA提取纯化 及测试方法 Methods of genomic DNA extraction from plants with high levels of polyphenols 2014-07-24发布 2015-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T30988—2014 目 次 前言 II 范围 规范性引用文件 2 3 缩略语 4 原理 实验室通用要求 5 试剂与溶液 6 仪器和设备 提取步骤 8 DNA纯度、浓度测试 9 GB/T30988—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国测试技术研究院提出。 本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)归口。 本标准起草单位:中国测试技术研究院、中测测试科技有限公司。 本标准主要起草人:谭和平、沈兴中、唐祥凯、周李华、孙登峰。 GB/T30988—2014 多酚类植物基因组DNA提取纯化 及测试方法 1范围 本标准规定了以茶树为代表的多酚类植物基因组DNA提取纯化方法以及DNA纯度、浓度测试 方法。 本标准适用于茶树、马铃薯、樱桃、葡萄以及其他富含多酚类的植物的植物基因组DNA提取及 纯化。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和实验方法 GB/T19495.3—2004转基因产品检测核酸提取纯化方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Tris:三(羟甲基)氨基甲烷 SDS:十二烷基磺酸钠 PVP:聚乙烯吡咯烷酮 RNaseA:核糖核酸酶A FF:二甲苯青 EDTA:乙二胺四乙酸 TE:三(羟甲基)氨基甲烷-乙二胺四乙酸 4原理 4.1提取纯化 在液氮条件中,通过物理研磨方法破碎多酚类植物叶片的细胞,利用抗氧化剂防止多酚类化合物氧 化褐变,同时利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的粘接性去除多酚类化合物及其他次生代谢物等杂质,然后利 用化学方法使DNA从植物细胞中释放出来,再弃除DNA中的蛋白质等杂质,以及DNA提取过程中 加入的异戊醇、异内醇、乙醇等有机溶剂,最后得到纯的DNA。 4.2 纯度测试 在pH7~8.5下,根据DNA在260nm处有吸收高峰,蛋白质在280nm处有吸收高峰,硫氰酸盐、 碳水化合物(糖类)在230nm处有吸收高峰,酚类物质在270nm处有吸收高峰的特性,利用A260/A280、 1 GB/T30988—2014 A260/A230A260/A270的比值来评估DNA样品的纯度。然后利用A260=1相当于50g/mL的双链 DNA来计算DNA的浓度。 利用荧光染料(如溴化乙啶)可与琼脂糖凝胶中的DNA嵌合,在紫外源激发下发出荧光的特性,通 过观察DNA条带是否单一、清晰、明亮来评估DNA样品的纯度。 5实验室通用要求 按照GB/T19495.3一2004第4章中实验室通用要求的规定执行。 6试剂与溶液 6.1本标准所使用的水均为一级水,符合GB/T6682一2008的要求。除非另有说明,在分析中仅使用 分析纯试剂,所有试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后经高压灭菌后使用,不宜高压灭菌的试剂应用 0.22μm膜过滤除菌;酶溶液应避免反复冻融。 6.2# 葡萄糖(glucoseC,HizO,)。 6.3 焦亚硫酸钠(sodiumPyrosulfite,NazS,Os)。 6.4 聚乙烯吡咯烷酮polyvinylpyrrolidone,PVP,(CHNO),」。 6.5F β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,HOCH,CH,SH)。 6.6 十二烷基磺酸钠(sodiumdodecyl sulfate,SDS,C2H25O,SN)。 6.7 乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic aciddisodium salt,Na,EDTACiH4N,O.Na2)。 6.8 三(羟甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)methylaminomethane,Tris,C,HNO:」。 6.9 无水乙醇(alcohol,C,H,OH),4℃保存及使用。 6.10 氯化钠(sodiumchloride,NaCl)。 6.11 三氯甲烷(chloroform,CHCl)。 6.12 异丙醇[isopropyl alcohol,CH.CH(OH)CH,]。 6.13 异戊醇[isoamyl alcohol,(CH,)CHCH,CHOH 6.14乙酸钠(sodiumacetate,NaAc)溶液:3mol/L,用乙酸调pH至5.2,不要高压灭菌(0.22μm膜过 滤)。 6.15 氯仿:异戊醇:乙醇溶液(80:4:16)。 6.16 DNA提取液I:100mmol/LTris-Cl,20mmol/LEDTA,500mmol/LNaCl,1.5%SDS。 6.17 DNA提取液I:18.6g葡萄糖,6.9gNazSzO5,6.0gPVP,240μLβ-硫基乙醇,加水至300mL。 6.18 TE缓冲液(pH8.0):10 mmol/LTris-Cl,1 mmol/LEDTA,使用HCI或NaOH调节pH。 6.19 RNaseA酶溶液:10mg/mL,一20℃保存,避免反复冻融。 6.20 70%乙醇溶液:4℃保存及使用。 6.21 10×上样缓冲液:含0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,30%甘油水溶液。 7仪器和设备 7.17 冷冻研磨机(样品冷冻,研磨都处于液氮条件下)。 7.2离心机(可以在4℃下进行离心,离心转速10000r/min以上)。 7.3 水浴锅(工作范围60℃~70℃)。 7.4 涡旋器。 7.5 平板电泳仪。 2

pdf文档 GB-T 30988-2014 多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法

安全标准 > 国标 > 文档预览
中文文档 7 页 50 下载 1000 浏览 0 评论 0 收藏 3.0分
温馨提示:本文档共7页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
GB-T 30988-2014 多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法 第 1 页 GB-T 30988-2014 多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法 第 2 页 GB-T 30988-2014 多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法 第 3 页
下载文档到电脑,方便使用
本文档由 思安2023-02-08 17:30:15上传分享
给文档打分
您好可以输入 255 个字符
网站域名是多少( 答案:github5.com )
评论列表
  • 暂时还没有评论,期待您的金玉良言
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们微信(点击查看客服),我们将及时删除相关资源。