ICS 67.180.20 X 69 中华人民共和国国家标准 GB/T35538—2017 工业用酶制剂测定技术导则 Technical guides for industrial enzyme preparations assay 2018-07-01实施 2017-12-29发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T35538—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC64）提出 本标准由全国食品工业标准化技术委员会工业发酵分技术委员会（SAC/TC64/SC5）归口。 本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、浙江艾杰斯生物科技有限公司、山东隆科特酶制剂有 限公司、青岛蔚蓝生物集团有限公司、诺维信（中国）投资有限公司。 本标准主要起草人：张蔚、田亚琼、刘明、滕智津、武竹英、李聪、翟文景、张世童、潘宏涛、郭庆文 陈亮珍。 GB/T 35538—2017 工业用酶制剂测定技术导则 1范围 本标准规定了工业用酶制剂的术语和定义、理化指标分类、酶活力测定导则及酶活力测定方法的实 施与评价等要求 本标准适用于工业用酶制剂产品关键测定指标测定方法的建立、实施及评价的指导 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 QB/T1803 工业酶制剂通用试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 酶制剂 Jenzymepreparation 由动物或植物的可食或非可食部分直接提取，或由传统或通过基因修饰的微生物（包括但不限于细 菌、放线菌、真菌菌种）发酵、提取制得，具有特殊催化功能的生物制品 注：商品化的工业用酶制剂产品允许加人易于产品贮存、使用的配料成分。 3.2 酶活力 Jenzyme activity 酶在一定条件下催化某一特定反应的能力。 工业用酶制剂理化指标分类 4 4.1工业用酶制剂测定关键性指标：酶活力。 4.2 2工业用酶制剂测定通用性指标如下： a）容重； b）细度； c)pH。 4.3 3其他指标。 C 工业用酶制剂酶活力测定方法建立指导 5.1酶活力测定反应条件关键因素的选择确立指导 5.1.1底物的选择 底物的选择方法如下： 1 GB/T35538—2017 一应对可用的底物做筛选： 专一性不强的酶，可作用于多种底物时，在多种底物中，选择米氏常数K最小的底物； 一专一性较强的酶，选择该酶的专一性催化底物； 根据检测仪器和实际检测条件，选择便于检测的底物或产物： 解度的限制，价格因素，可将底物浓度降为K㎡的10倍）。 示例1： 蛋白酶：以酪蛋白作为底物。酪蛋白是哺乳类动物乳汁的主要成分，以大分子蛋白作为底物，可以准确反映蛋白酶 的催化性能和活力。 示例2： 脂肪酶：以甘油三丁酸酯作为底物，基于酸碱滴定的原理建立检测方法。虽然脂肪酶种类繁多，但由于该类酶多属 于非专一性催化，以甘油三丁酸酯作为底物能反映绝大多数脂肪酶的活性。 示例3： 纤维素酶：以羟甲基纤维素（CMC)作为底物，检测还原糖产物在一定时间内的增量；或者用黏度法，以一定时间内 反应体系中黏度的降低反映底物的降解程度，从而获得纤维素酶的活力。此外，还可以测定酶的滤纸酶活力，即以特定 的纤维素滤纸为底物，测定纤维素酶对滤纸的降解能力。 示例4： α-淀粉酶：选择淀粉作为底物，用碘试剂检测淀粉被降解的程度反映淀粉酶的活力；或者采用亚乙基-G7-PNP作为 底物，α-淀粉酶与α-葡萄糖苷酶共同作用将该底物水解释放黄色的p-硝基苯酚，利用全自动生化分析仪进行检测 5.1.2温度的选择 温度的选择方法如下： 建立方法时，需要提前确定酶的最适反应温度； 根据酶的种类，预估其最适反应温度，在估计值附近选择一个范围（土10℃），测定酶在此温度 区间酶活力的变化，从而确定该酶在某种反应体系中的最适温度 注1：从温血动物组织中提取的酶最适温度一般在35℃～40℃之间；植物酶的最适温度一般在40℃～50℃之间； 大多数酶在60℃以上会发生变性并逐渐失去活力。 应温度，并通过其他反应条件的优化最终得到可行的检测方法； 注2：有些检测设备或原理对于温度有一定限制，可以通过延长反应时间、增加底物或酶的浓度等途径得到改善和 解决。 有时，为了更好体现酶制剂在实际应用条件下的酶活力，需以实际应用时的温度条件作为反应 温度。 5.1.3pH的选择 pH是酶活力测定的一个重要参数，选择方法如下： 一酶的最适pH需通过实验的方法测得，因底物的种类和浓度、温度、反应时间、缓冲液的种类和 浓度等不同而不同； 一同一类酶的反应最适pH相近，酶制剂新产品可以参照现有的同类酶的反应最适pH，经过反 应条件的筛选最终确定最适反应pH； 在选择最适pH时要保证酶的稳定性，把酶的反应pH曲线和酶的稳定pH曲线结合起来，选 SG 择底物和缓冲溶液体系以达到最适的反应pH。 5.1.4缓冲溶液的选择 缓冲溶液的选择方法如下： 2