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ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T18646—2018 代替GB/T18646—2002 动物布鲁氏菌病诊断技术 Diagnostic techniques for animal brucellosis 2018-09-01实施 2018-02-06发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T186462018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T18646—2002《动物布鲁氏菌病诊断技术》。本标准与GB/T18646—2002相比, 主要技术变化如下: —一增加了规范性引用文件(见第2章); 一增加了缩略语(见第3章); 一增加了临床诊断方法,包括流行特点、临床症状和病理变化(见4.1、4.2和4.3); 一增加了试管凝集试验中的微量法(见4.6.1); 增加了补体结合试验中的微量法,并规定了其稀释液的制备、溶血素效价的测定、补体效价的 测定、溶血标准比色的制备方法(见4.7.1、附录B、附录C、附录D和附录E); 增加了间接酶联免疫吸附试验,并规定了酶联免疫吸附试验抗原包被板的制备、酶标抗体的制 备、酶联免疫吸附试验用试剂的配制(见4.8、附录G、附录H和附录I); 一增加了竞争酶联免疫吸附试验,并规定了酶联免疫吸附试验抗原包被板的制备、酶标抗体的制 备、酶联免疫吸附试验用试剂的配制(见4.9、附录G、附录H和附录I); 一增加了病原的涂片染色镜检(见4.10); 增加了病原的分离培养,规范了培养细菌所用的培养基及病料采集需采集的样本名称(见4.11、 附录J和附录K); 一增加了病原的生化特性鉴定方法,并规定了不同生化试验的培养基制备(见4.12.1~4.12.5、附 录L和附录M); 一增加了病原的因子血清试验鉴定方法,以表格形式列出单因子血清试验结果(见4.12.6和 表 4); 一增加了病原的噬菌体溶解试验鉴定方法,以表格形式列出各菌种噬菌体溶解试验结果(见4.12.7 和表5); 增加了布鲁氏菌种的PCR扩增图谱鉴定技术,并规范了其8对引物序列,以图谱形式列出布 鲁氏菌种10个种的扩增条带和3个疫苗株的扩增条带(见4.13、附录N和图1); 一增加了警告内容,对于剖检、采样及实验室开展相关病原活动部分及实验室接触有毒物质部分 给以警告。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本标准起草单位:辽宁省动物疫病预防控制中心(辽宁省动物医学研究院)、中国动物卫生与流行病 学中心、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准主要起草人:李璐、赵晓彤、曹东、范伟兴、段亚良、田莉莉、步志高、顾贵波、杨作丰、赵凤菊、 谷志大、狄栋栋、闫明媚、张慧、魏、郑洪玲、张喜悦、胡森。 1 GB/T186462018 引言 布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌属细菌感染导致人兽共患的传染病,在全世界范围内严重威 胁人类健康并影响畜牧业发展。布鲁氏菌属包括羊种布鲁氏菌(B.melitensis)、牛种布鲁氏菌(B.abor 菌(B.neotomae)、鲸种布鲁氏菌(B.ceti)、鳍种布鲁氏菌(B.pinnipedialis)和田鼠种布鲁氏菌 (B.microti)及新报道的B.inopinata,其中动物布病主要是由羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌和猪种布 鲁氏菌感染羊、牛和猪等动物呈急性或慢性经过,是人布病的主要传染来源。其临床主要特征是生殖器 官和胎膜发炎,母畜流产、乳腺炎、不育和各种组织(如睾丸、关节)的炎症。世界动物卫生组织[World OrganizationforAnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE]将布病列为法定报告 的传染病,我国《一、二、三类动物疫病病种名录》规定布病为多种动物共患的二类动物疫病。 本标准参考了OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》,转化了其相关的布病诊断方法并引入到本标 准中。本标准修订了原有血清学诊断方法,引人了ELISA诊断方法,建立了我国微量凝集反应,补充了 病原学和分子生物学诊断方法,不仅适用于我国布鲁氏菌病诊断需求,也达到了国际诊断水平。 Ⅱ GB/T18646—2018 动物布鲁氏菌病诊断技术 1范围 本标准规定了动物布鲁氏菌病的临床诊断、血清学和病原学诊断的技术方法、操作程序和判定 标准。 本标准规定的流行特点、临床症状,病理变化适用于动物布鲁氏菌病的临床诊断。 虎红平板凝集试验和间接酶联免疫吸附试验,适用于动物布鲁氏菌病的初筛试验; 乳牛全乳环状试验,适用于泌乳母牛布鲁氏菌病的初筛试验; 试管凝集试验、补体结合试验和竞争酶联免疫吸附试验适用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌病的血清 学确诊; 病原的显微镜检查、分离培养适用于布鲁氏菌病的病原学初步诊断:病原的鉴定和PCR试验适用 于动物布鲁氏菌病的病原学确诊 本标准规定的乳牛全乳环状试验,不适用于检测患乳房炎及其他乳房疾病母牛的乳、初乳、脱脂乳 和煮沸过的乳,也不适用于腐败、变酸和冻结过的乳。 本标准规定的虎红平板凝集试验、试管凝集试验和补体结合试验,不适用于犬种和绵羊附睾种布鲁 氏菌的检测。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB19489—2008实验室生物安全通用要求 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 OIE世界动物卫生组织(WorldOrganizationtorAnimalHealth(英),OfficeIntentional desEpi zootic(法)) RBT虎红平板凝集试验(RoseBengalTest) MRT乳牛全乳环状试验(MilkRingTest) SAT试管凝集试验(SerumAgglutinationTest) CFTE 补体结合试验(ComplementFixationTest) iELISA间接酶联免疫吸附试验(IndirectEnzymeLinkedImmunosorbentAssay) cELISA竞争酶联免疫吸附试验(CompetitiveEnzymeLinkedImmunosorbentAssay) PCR聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) DNA脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleicacid) dNTPs脱氧核苷三磷酸(Deoxy-RibonucleosideTriphosphate) TBE三羟甲基氨基甲烷硼酸乙二胺四乙酸缓冲液(TrisBoricAcidEDTA) 1
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