ICS 65.020.01 CCS B 04 中华人民共和国国家标准 GB/T 40642—2021 桑叶提取物中1-脱氧野霉素的检测 高效液相色谱法 Determination of 1-deoxynojirimycin in extract of mulberry leaf- HPLC 2021-10-11发布 2022-05-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T40642—2021 前言 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由国家林业和草原局提出。 本文件由全国林化产品标准化技术委员会（SAC/TC558）归口。 本文件起草单位：北京林业大学、深圳市品牌建设促进中心、浙江圣氏生物科技有限公司、河北冠卓 检测科技股份有限公司、中国标准化研究院、中山洪力健康食品产业研究院、中国林业科学研究院林产 化学工业研究所、北京电子科技职业学院、中国科学院兰州化学物理研究所、无限极（中国）有限公司 共同。 本文件主要起草人：雷建都、杨志花、刘静、王璐莹、章兴、席兴军、张敬轩、张逸、辛秀兰、赵新颖、 陈亮、邸多隆、王成章、裴栋、兰韬、李文君、孙红梅。 1 GB/T 40642—2021 桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的检测 高效液相色谱法 1范围 本文件描述了采用高效液相色谱测定桑叶中1-脱氧野尻霉素含量的原理、试剂与材料、仪器与设 备、检测方法、结果计算与表示、重复性、精密度和加标回收率。 本文件适用于桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682 2分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 AG 4原理 苏甲氧羰酰氯（FMOC-CI)是一种氨基酸衍生化试剂，主要适用于伯胺和仲胺的衍生化，反应后的 衍生物具有较强的紫外吸收，最大吸收波长为254nm。由于1-脱氧野霉素（DNJ）分子中有仲胺结 构，因此可以采用FMOC-CI作为衍生化试剂对DNJ进行衍生，利用HPLC对1-脱氧野尻霉素进行定 量检测，检测波长为254nm。DNJ与甲氧炭酰氯的反应式见图1。 HO"H? HO"H) H HCI QH OH OH 110 110 OH C1 FMOC-CI DN.I DN.-FMOC 图1DNJ与荔甲氧羰酰氯的反应式 5试剂或材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682一级的水。 1 GB/T406422021 5.1试剂 5.1.1 乙腈（CzH,N），色谱纯。 5.1.2 冰乙酸(CH,COOH)。 5.1.3苏甲氧酰羰氯（C1sHiCIO2）。 5.1.4甘氨酸（C,H,NO2）。 5.1.5硼酸钾缓冲液，pH8.5。 5.2 溶液配制 苏甲氧酰氯FMOC-CI乙腈溶液：称取0.065gFMOC-Cl,精确至0.001g，用乙腈溶解，并定容至 50mL，得到5mmol/L的FMOC-CI乙睛溶液。FMOC-Cl乙睛溶液应现配现用。 5.3 3标准品 1-脱氧野尻霉素标准品，纯度98%。 5.4 1-脱氧野房霉素标准储备溶液 称取100mg（精确至0.001g）1-脱氧野霉素标准品，置于100mL容量瓶中，用0.01mol/L盐酸 水溶液溶解并定容至刻度线，混匀。 5.5 51-脱氧野霉素标准工作溶液 将1-脱氧野霉素标准储备溶液用盐酸水溶液稀释制备一系列标准溶液，标准液浓度分别为 0.01mg/mL.0.02mg/mL.0.04mg/mL.0.06mg/mL.0.08mg/mL.0.10mg/mL,临用时配制。 5.6材料 滤膜，孔径0.45um有机相滤膜。 6 仪器与设备 6.1 分析天平：灵敏度万分之一克。 6.2超声振荡器/超声清洗器：超声频率40kHz~80kHz。 6.3高效液相色谱仪：包含紫外检测器或二极管检测器、色谱工作站。 6.4 恒温水浴锅。 7 检测方法 7.1 样品处理 称取桑叶提取物0.100g试样，精确至0.001g，用0.010mol/L盐酸水溶液超声辅助溶解15min， 冷却至室温后，定容至50mL，得到试样溶液。 7.2 衍生化反应 取标准品或试样溶液100uL置于1.5mL的离心管中，依次加人0.4mol/L的硼酸钾缓冲溶液 (pH8.5)175μL和5mmol/L衍生化试剂FMOC-Cl乙睛溶液250μL，充分混合30s，在25℃恒温水 2