ICS 07.080 A 40 中华人民共和国国家标准 GB/T38505—2020 转基因产品通用检测方法 General detection methods of genetically modified products 2020-03-06实施 2020-03-06发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T38505—2020 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口， 检疫局检验检疫技术中心、甘肃中商食品质量检验检测有限公司、广西出人境检验检疫局检验检疫技术 中心、吉林省农业科学院、上海市计量测试技术研究院、甘肃省商业科技研究所有限公司。 本标准主要起草人：付伟、王晨光、朱鹏宇、杜智欣、魏霜、朱海、洪霞、郑秋月、付辉、何海宁、李飞武、 金虹、安小苹、朱水芳、马涛、刘刚、杨光瑞、曹际娟、袁顺捷、黄文胜。 1 GB/T38505—2020 转基因产品通用检测方法 1范围 本标准规定了转基因产品的定性检测方法。 本标准适用于水稻、玉米、大豆，油菜、马铃薯、甜菜、首猎等及其加工产品中转基因成分的实时荧光 PCR通用检测。 本标准方法的最低检出限为0.1%（质量分数）。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法 GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 18S rRNA 基因 18SrRNAgene 转录自18SrDNA，细胞核糖体的组分之一，作为植物内源基因。 3.2 来自花椰菜花叶病毒（Cauliflowermosaicuirus，CaMV）的35S启动子。 3.3 CaMV35S终止子35SterminatorfromCauliflowermosaicvirus 来自花椰菜花叶病毒（Cauliflowermosaicuirus，CaMV）的35S终止子。 3.4 NOs终止子terminator of nopaline synthase gene 来自胭脂碱合成酶基因的终止子。 3.5 E9终止子terminatorofribulose-1,5-biphosphatecarboxylasesmall subunit 来自豌豆核酮糖1，5-二磷酸羧化酶小亚基（ribulose-1，5-biphosphatecarboxylasesmallsubunit） 基因的3'端终止序列。 3.6 pat 基因phosphinothricin acetyltransderase gene 来自绿产色链霉菌（Streptomcesviridochromogenes），编码膦丝菌素乙酰转移酶（phosphinothricin 1 GB/T38505—2020 acetyltransderase,PAT)。 注：pat基因对除草剂草甘麟（glufosinate)具有耐受性。 3.7 Pin I 终止子 terminator of proteinase inhibitor I 来自马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ（proteinaseinhibitorⅡ，PinIⅡ）的终止子。 3.8 RbcS4启动子promoterofribulose-1,5-biphosphatecarboxylasesmall subunit1A 来自拟南芥核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基1A（ribulose-1，5-biphosphatecarboxylase small subunit1A，RbcS4）编码基因的启动子。 3.9 DAS402785'边界序列5'-end event-specific sequenceofDAS40278 DAS40278转化体外源插入片断5端与玉米基因组的连接区序列。 注：该序列包括外源插人片段的部分载体序列和玉米基因组的部分序列。 3.10 DP3054233边界序列3'-endevent-specific sequenceofDP305423 DP305423转化体外源插入片断3'端与大豆基因组的连接区序列。 注：该序列包括外源插人片段的部分载体序列和大豆基因组的部分序列。 3.11 CV1275'边界序列5'-end event-specific sequence of CV127 CV127转化体外源插人片断5端与大豆基因组的连接区序列。 注：该序列包括外源插人片段的部分载体序列和大豆基因组的部分序列。 3.12 Ct值cycle threshold 反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 4试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。试验用水符合GB/T6682中一级水的规格。 4.1实时荧光PCR预混液 采用经验证符合实时荧光PCR要求的实时荧光PCR预混液 4.2500mmol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH8.0） 称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加人70mL水中，并用NaOH溶液调pH值至8.0，加水定容至 100mL。在103.4kPa(121℃）条件下灭菌20min。 4.31mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐溶液（pH8.0） 称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解于800mL水中，用盐酸调pH值至8.0,加水定容至1000mL。 在103.4kPa（121℃）条件下灭菌20min。 4.4TE缓冲液(pH8.0) 钠溶液（4.2），加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃）条件下灭菌20min。 2