ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T38579—2020 生物产品中光合细菌测定 Determination of photosynthetic bacteria in biologic products 2020-03-31实施 2020-03-31发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T38579—2020 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：湖南农业大学、中国标准化研究院、江汉大学、北京工商大学、武汉明了生物科技 有限公司、北京萨姆伯科技有限公司。 本标准主要起草人：周辉、马爱进、彭海、贾英民、田云、郝帅。 GB/T38579—2020 生物产品中光合细菌测定 1范围 本标准规定了生物产品中光合细菌的测定方法。 本标准适用于生物产品中深红红螺菌（Rhodospirillumrubrum）、黄褐红螺菌（Rhodospirillum fuluum）、沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonaspalustris）、荚膜红细菌（Rhodobactercapsulatus）和球 形红细菌（Rhodobactersphaeroides）的测定 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 生物产品 biologicproducts 利用生物技术获得的产品。 注：本标准中的生物产品特指含光合细菌的产品。 3.2 光合细菌photosyntheticbacteria SAG 具有原始光能合成体系的原核生物，能在厌氧条件下进行不放氧光合作用细菌的总称。 注：专指不产氧光合细菌，尤其是紫色非硫细菌类。属于变形菌门（Proteobacteria）α-变形菌纲（Alphaproteobacteria）红 螺菌目（Rhodospirillales）、根瘤菌目（Rhizobiales）、红杆菌目（Rhodobacterales），包括深红红螺菌、黄褐红螺菌、沼泽 红假单胞菌、荚膜红细菌和球形红细菌等。 3.3 多核苷酸多态性 Emultiple nucleotide polymorphism;MNP 一段核苷酸区域内多个核苷酸引起的序列多态性。 4原理 将待分离的样品进行稀释后，接种于选择性培养基中，由单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌 落。根据平板的菌落数及挑取菌落的生理生化、MNP鉴定结果，对生物产品中的光合细菌进行计数 C 试剂或材料 本方法所用试剂均为分析纯，除特殊说明外，实验用水均为GB/T6882规定的二级水。 1 GB/T38579—2020 5.1AT培养基：参见附录A中A.1。 5.2 2光合细菌分离琼脂：参见A.2。 5.3 3磷酸盐缓冲液：参见A.3。 5.4革兰氏染色液：参见A.4。 5.5 5多重PCR扩增与文库构建试剂盒。 5.6 6高通量测序试剂盒。 引物：见附录B。 6 仪器设备 6.1光照恒温培养箱：照度不小于20001x，30℃土1℃。 6.2天平：精度为0.001g。 6.3 3高通量测序仪。 6.4抽滤瓶。 6.5 5均质器、无菌均质袋、均质杯。 6.6 5水相滤膜：微孔径0.22um。 6.7微需氧培养罐：能维持1%氧浓度的透明培养容器装置。 6.8 3无菌锥形瓶：容量250mL，500mL。 6.9 螺口试管：容量13mL。 6.10 无菌培养皿：直径90mm。 6.11 显微镜：最低100×。 7样品 7.1采样原则 样品的采集应遵循随机性、代表性的原则。采样过程应遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来 污染。 7.2采样方法 7.2.1应在同一批次产品中采集样品，每件样品的采集量应满足微生物指标检验的要求，一般不少于 500 g(mL) 7.2.2独立包装不大于500g的固体产品或不大于500mL的液态产品，取完整包装 7.2.3独立包装大于500mL的液态产品，应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体，使其达到均匀后采集 适量样品，放人无菌采样容器内作为一件样品 7.2.4独立包装大于500g的固体产品，应用无菌采样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品，放 人同一个无菌采样容器内作为一件样品。 7.3采集样品的贮存和运输 7.3.1 应尽快将样品运往实验室检验。 7.3.2应在运输过程中保持样品完整 7.3.3应在接近原有贮存温度条件下贮存样品，或采取必要措施防止样品中微生物数量的变化。 2