ICS 11. 220 B 41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T18651—2002 牛无浆体病快速凝集检测方法 Methods of fast agglutination test for bovine anaplasmosis 2002-02-19发布 2002-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T18651—2002 前 言 过去认为无浆体（anaplasma）是原虫，现确定是一种立克次氏体，译名还有微粒孢子虫、无形体等， 根据生物学特征，“无浆体”最为确切，因此本标准中用此名。牛无浆体病是一种牛血液传播病。牛一旦 感染，即可成为终生带虫者，使养牛业造成很大经济损失。世界动物卫生组织［WorldOrganizationfor AnimalHealth（英），OfficeIntentionaldesEpizootic（法），OiE」将本病列为B类传染病，本病也是我国 出人境动物检疫对象之一。 OIE推荐诊断牛无浆体病的方法中，卡片凝集检测具有微量、快速、灵敏度高和特异性好等优点，故 得到广泛应用。我国曾报道过用补体结合试验诊断牛无浆体病，但因部分血清有抗补体作用，而常被误 判，目前，国内尚无卡片凝集检测标准。 温度范围为25C~28C。 本标准由中华人民共和国农业部提出 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部动物检疫所。 本标准主要起草人：吴鉴三、张肖正。 中华人民共和国国家标准 牛无浆体病快速凝集检测方法 GB/T 18651—2002 Methods of fast agglutination test for bovine anaplasmosis 1范围 本标准规定了牛无浆体病快速凝集检测方法 本标准适用于牛无浆体病的诊断。其他动物无浆体病的诊断亦可参照本方法。 2试剂和器械 2.1试剂 a）无浆体凝集抗原，4C保存； b）阴性协同血清（牛血清因子），一70C～一80C保存； c）阳性对照血清，一20C保存； d）阴性对照血清，一20C保存。 以上试剂由制标单位提供。 2.2器械 2.2.1微量移液器：5μL、10μL或5μL～25μL（连续可调）。 2.2.2微量移液器头若干个。 2.2.3试验用板：取85mmX12.5mm洁净透明塑料平板，用油漆或油性记号笔划成4排X6个区位。 3操作步骤 实验应在25C～28C环境下进行。 3.1被检血清按常规采集和分离，从采集到第一次检测前，要在室温放置38h～48h，然后冷藏或冻存 备用，长期低温保存会使阳性率下降。 3.2取出凝集抗原、阴性协同血清、阳性和阴性对照血清以及被检血清，在25C～28C下放置 15min~20min。 3.3同时在平板第一排左起1、2区位划上阳性（十）和阴性（一）符号，其余各区位依次编上被检血 清号。 3.4用微量移液器在编号区位内按号分别加阳性、阴性对照血清和待检血清10μL。 3.5在各区位加凝集抗原5L，靠近血清，互不接触。 3.6在各区位抗原旁加阴性协同血清10μL，互不接触。 3.7用牙签将各区位的三种反应物摊成液面（约成人小指甲盖面积），混合均勾。做一份血清换用一根 牙签。 3.8用手轻轻晃动该平板，在4min～8min内，当阳性对照血清开始出现凝集反应时，对着黑色背景 判读结果。 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-02-19批准 2002-05-01实施 1 GB/T18651—2002 判定标准 4.1阳性对照血清出现颗粒清晰的凝集现象。 4.2 2阴性对照血清没有可辨认的任何凝集颗粒。 4.3 被检血清凡出现可辨认的凝集颗粒的凝集现象，均判为阳性反应。 2 GB/T18651—2002 判定标准 4.1阳性对照血清出现颗粒清晰的凝集现象。 4.2 2阴性对照血清没有可辨认的任何凝集颗粒。 4.3 被检血清凡出现可辨认的凝集颗粒的凝集现象，均判为阳性反应。 2