ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38172—2019 蛋白A亲和层析介质 Protein A affinity chromatographic medium 2019-10-18实施 2019-10-18发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 38172—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国科学院过程工程研究所、中国标准化研究院、中科森辉微球技术（苏州）有限 公司。 本标准主要起草人：黄永东、赵岚、朱凯、吴学星、马光辉、苏志国、巩方玲、马爱进、杨维兴、王少云、 秦佳。 1 GB/T 38172—2019 蛋白A亲和层析介质 1范围 本标准规定了蛋白A亲和层析介质的技术要求、检测方法、检验规则、标签、标志、包装、运输和 贮存。 本标准适用于蛋白A亲和层析介质的生产与检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 191 包装储运图示标志 GB/T 5475 离子交换树脂取样方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蛋白A亲和层析介质proteinAaffinitychromatographicmedium 将重组蛋白A偶联至琼脂糖分离介质上制备的一类层析介质。 技术要求 4 4.1 外观要求 蛋白A亲和层析介质应球形饱满、表面光滑，在光学显微镜下应具有透明性。 4.2 性能要求 应符合表1中的规定。 表1蛋白A亲和层析介质的主要性能要求 项目 指标 范围粒径比（W粒径）/% ≥90 粒径 平均粒径（a）/μm 90.0±13.5 最高流速"/（cm/h） ≥300 配基密度（p)/（mg/mL） 4~8 动态载量（Q10%）/（mg/mL） >40 1 GB/T 38172—2019 表1 (续) 项目 指标 菌落总数/（CFU/mL) <100 pH 3.0 ≤0.1 5-羟甲基糠醛脱落量/（ug/mL） pH 13.0 ≤0.1 粒径在45.0μm~165.0um范围内试样颗粒的体积与全部试样颗粒体积之比。 b在0.10MPa压力下可达最高流速 每毫升介质对人免疫球蛋白（h-IgG）的吸附量 5检测方法 5.1外观 5.1.1样品处理 按照GB/T5475直接从产品中抽取5mL样品，置于50mLG3型号砂芯漏斗中抽干5min。用符 合GB/T6682的三级水清洗5次，每次2min，最后用真空泵在0.1MPa压力下抽干5min。将洗净的 介质置于烧杯中，向其中补加三级水，保证介质上应有2cm的三级水。混勾后得到蛋白A亲和层析介 质与水的混合体系。 5.1.2样品观测 用塑料吸管吸取混合体系置于载玻片上，调整显微镜放大倍数。以视野里80%以上面积均为蛋白 A亲和层析介质为标准，用塑料吸管增减载玻片上的蛋白A亲和层析介质，最后用盖玻片压上。调节 光学显微镜焦距，使视野中的影像清晰。拍摄蛋白A亲和层析介质照片并保存。 5.2粒径 5.2.1样品处理 方法同5.1.1。 5.2.2样品检测 品进行测定。 5.2.3结果计算 5.2.3.1范围粒径比 按式（1)计算： SAC W粒径= ....(1) =45 式中： W粒径 范围粒径比，%； 2 GB/T 38172—2019 W. 粒径为k（um）颗粒的体积与全部试样颗粒体积之比，%。 5.2.3.2平均粒径 按式（2)计算： .(2 ) N 式中： p 一所统计的一定数量介质颗粒的平均粒径，单位为微米（um）； d一单个颗粒的粒径，单位为微米（μm)； N一所统计的介质颗粒的数目。 在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 5.3最高流速 5.3.1样品处理 方法同5.1.1。 5.3.2样品装柱 选用$1.60cm×20.00cm的层析柱，将介质与水的混合浆液倒人层析柱中，堵住柱子出口，静置， 控制介质床层高度为10.00cm士0.20cm，柱子上端充满水。打开柱子入口，以0.5mL/min的流速连 续向柱中通人10个柱体积的三级水，床层稳定后即可进行测试。 5.3.3样品测定 将层析柱连人中低压层析系统。测定时，从零开始设定一定流速，（mL/min），保持该流速5min 后，记录此时柱压p（MPa）。继续增加流速，并测定相应流速下的柱压。直到压力达到0.10MPa为 止，此时对应流速记录为7) 5.3.4结果计算 按式(3)计算： 6000.1 Fmax= :(3 ) S 式中： Fmax 最高流速，单位为厘米每小时（cm/h）； 在0.10MPa压力下的体积流速，单位为毫升每分（mL/min）； U0.1 S 一层析柱截面积，单位为平方厘米（cm）； 60 分钟转化为小时的换算系数 在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 5.4配基密度 5.4.1溶液配制 5.4.1.120g/L硼酸溶液 准确称取20.00g硼酸于250mL烧杯中，加人三级水溶解后定容至1000mL。 3