ICS 65.120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 22260—2008 饲料中甲基睾丸酮的测定 高效液相色谱串联质谱法 Determination of methyltestosterone in feeds- High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry 2008-08-01发布 2008-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22260—2008 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 (北京)。 本标准主要起草人:赵根龙、苏晓鸥、苏淑清、孙志文、索德成 GB/T22260—2008 饲料中甲基睾丸酮的测定 高效液相色谱串联质谱法 1范围 本标准规定了以高效液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS)测定饲料中甲基睾丸酮含量的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中甲基睾丸酮的测定,配合饲料、浓缩饲料、 添加剂预混合饲料的定量限为10ug/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—1992,neqISO3696:1987) GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 饲料样品中的甲基睾丸酮以甲醇溶液超声提取,提取液离心后经C18固相萃取柱净化,以甲醇洗 脱,用高效液相色谱串联质谱仪、电喷雾正离子方式进行测定。 4试剂和材料 除特殊注明外,本标准所用的试剂均为分析纯,水为蒸馏水,色谱用水符合GB/T6682一级用水的 规定。 4.1甲醇:色谱纯。 4.3甲醇溶液Ⅱ:分别用量筒量取200mL甲醇(4.1)和800mL水,混匀。 4.4甲基睾丸酮标准品:纯度97%~103%。 4.5甲基睾丸酮标准溶液 4.5.1甲基睾丸酮标准储备液:准确称取甲基睾丸酮标准品(4.4)0.0500g,置于50mL容量瓶中,用 甲醇(4.1)溶解并定容至刻度,摇匀,其浓度为1mg/mL,贮于4℃~6℃冰箱中,有效期三个月。 4.5.2甲基睾丸酮标准工作液:准确吸取甲基罩丸酮标准储备液(4.5.1)5.00mL.置于50mL容量瓶 中,用甲醇(4.1)溶解并定容至刻度,摇匀,其浓度为100μg/mL。再以此稀释液配置10μg/mL、 1μg/mL、100ng/mL、10ng/mL的标准工作液。有效期一个月。 4.6Ci固相萃取柱:载体60mg;承载液体积3mL。 5仪器 5.1实验室常用仪器、设备。 5.2分析天平:感量为0.0001g和0.001g各一台。 5.3超声水浴。 5.4离心机:4000r/min~5000r/min。 SAC 1 GB/T22260—2008 5.5 固相萃取装置。 5.6配备电喷雾离子源(ESI)的液相色谱串联质谱仪。 5.7可控温30℃~50℃氮吹装置。 6试样制备 按照GB/T20195制备样品,全部通过0.28mm孔筛,混匀,装人密闭容器中,避光低温保存, 备用。 7 分析步骤 7.1提取 称取饲料样品5g(准确至0.001g),置于100mL离心管中,准确加人提取溶剂(4.2)50.00mL,加塞 充分摇动1min,再置超声水浴中超声提取20min,其间充分摇动两次。取出后于离心机上5000r/min离 心10min。 7.2净化 分别用3mL甲醇、3mL水活化固相萃取柱(4.6)准确移取5mL离心液(7.1)分次上柱,控制过 柱速度在1mL/min以内。再用3mL水和3mL甲醇溶液(4.3)洗涤固相萃取柱,抽近干后用甲醇 (4.1)2mL洗脱。在氮吹装置(5.7)上40℃下用氮气吹干。准确加入2mL甲醇(4.1),涡旋振荡 1min,过0.45μm滤膜,上机测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 色谱柱:Cs柱,柱长150mm,柱内径2.1mm,粒度3.5μm或性能类似的分析柱。 柱温:室温。 流动相组成:甲醇十0.1%乙酸溶液=80十20(V+V2)。 流动相流速:300μL/min。 进样量:20μL。 7.3.2质谱条件 电喷雾离子源(ESI)正离子方式检测。 喷雾电压:5000V。 壳气流速:0.26L/min。 辅助气流速:6.9L/min。 毛细管温度:310℃。 母离子303,二级子离子为285、267。 碰撞能量见表1。 表1 甲基睾丸酮母离子及子离子碰撞能量表 母离子 子离子 碰撞能量/eV 303 285 23 303 267 22 其相对丰度比见表2。 表2甲基睾丸酮的子离子及相对丰度比 子离子(m/z) 285 267 相对丰度/% 100 95±19 2 GB/T22260—2008 7.3.3定性定量测定 取适量由7.2获得的样品制备液和相应浓度的甲基睾丸酮标准工作液(4.5.2)进行测定,以保留时 间和二级子离子m/z285、267进行定性。定性方法:试样保留时间与标准品的相对偏差不大于15%, 特征离子丰度与标准品相差不大于20%。定量方法:以二级子离子m/z285、267峰面积之和进行单点 或多点校正定量。 8结果计算与表述 8.1 结果计算 甲基睾丸酮在饲料中的质量分数X,以微克每千克(μg/kg)表示,可用式(1)计算: ..(1) m 式中: 选择性子离子色谱峰对应的甲基睾丸酮质量,单位为纳克(ng); mi m—试样质量,单位为克(g); n——稀释倍数。 8. 2 结果表示 平行测定结果用算术平均值表示,保留三位有效数字。 重复性 3

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